牛3種體細(xì)胞體外培養(yǎng)研究.pdf

1、從供、受體細(xì)胞準(zhǔn)備，重構(gòu)胚構(gòu)建與體外培養(yǎng)、妊娠到胎兒出生，核移植的效率受諸多因素的制約，其中供體細(xì)胞體外培養(yǎng)是影響體細(xì)胞核移植胚胎發(fā)育的一個重要方面。為了建立穩(wěn)定的牛體細(xì)胞體外培養(yǎng)方法，本實(shí)驗(yàn)對牛耳皮膚成纖維細(xì)胞、牛卵巢顆粒細(xì)胞和牛輸卵管上皮細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)方法進(jìn)行了研究，并對他們的生長特性作了探討。 研究結(jié)果表明： 1．DMEM及1640兩種培養(yǎng)液均適合牛耳皮膚的組織培養(yǎng)，M199不適宜牛耳皮膚組織體外培養(yǎng)。

2、 2．冷消化、熱消化和冷熱結(jié)合消化法均能從牛耳皮膚組織塊獲得較多的成纖維細(xì)胞，冷熱結(jié)合消化法較其它兩種消化法可以獲得更多的細(xì)胞數(shù)和更高的細(xì)胞貼壁率。 3．采用消化培養(yǎng)法、組織塊培養(yǎng)法和消化組織培養(yǎng)法三種方法研究不同培養(yǎng)方法對傳代牛耳成纖維細(xì)胞生長的影響，消化組織培養(yǎng)法較其它兩種方法能獲得較高的細(xì)胞貼壁率、活細(xì)胞率和較短的培養(yǎng)周期，是一種較好的牛耳成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法。 4．37℃，0.25％胰酶＋0.02％EDTA