四種雙生病毒的分子鑒定.pdf

1、雙生病毒是一類具有孿生顆粒形態(tài)的植物單鏈DNA病毒，在世界范圍內(nèi)廣泛發(fā)生，并已在多種重要經(jīng)濟(jì)作物上造成嚴(yán)重?fù)p失。自20世紀(jì)90年代起，我國的云南、廣西等省份的煙草、番茄、南瓜和番木瓜上已發(fā)現(xiàn)了多種雙生病毒。為了進(jìn)一步弄清雙生病毒在我國的發(fā)生、分布及危害情況，文章對(duì)海南和廣西的雙生病毒進(jìn)行了分子鑒定。 利用雙生病毒的簡(jiǎn)并性引物PA和PB，對(duì)采自海南和廣西的勝紅薊、假馬鞭、黃花捻、空心蓮子草、賽葵和南瓜樣品進(jìn)行了PCR檢測(cè)。序列分析

2、表明，33個(gè)病毒樣品均為雙生病毒，且可分為8種類型，其中類型Ⅱ～Ⅴ與已報(bào)道的雙生病毒十分相似，而類型Ⅰ、Ⅶ和Ⅷ則與已報(bào)道的雙生病毒的差異較大；類型Ⅵ與中國南瓜曲葉病毒(SquashleafcurlChinavirus，SLCCNV)十分相似，但我國SLCCNV未報(bào)道有DNA-B。為此，對(duì)類型Ⅰ、類型Ⅵ、類型Ⅶ及類型Ⅷ病毒分離物的全基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。 類型Ⅰ只有Hn51一個(gè)樣品，采自海南呈黃脈癥狀的空心蓮子草。Hn51基因組全

3、長(zhǎng)為2745個(gè)核苷酸(nts)，序列比較表明，Hn51與勝紅薊黃脈病毒(Ageratumyellowmosaicvirus,AYVV)的相似性最高，為65.2％。根據(jù)雙生病毒分類原則，Hn51是菜豆金色花葉病毒屬(Begomovirus)的一個(gè)新種，將其命名為空心蓮子草黃脈病毒(Alternantherayellowveinvirus，AlYVV)，這是我國首次在水生植物上分離到雙生病毒。用特異性引物對(duì)Hn51樣品進(jìn)行了DNA-B和DN

4、Ap的研究，但都沒有發(fā)現(xiàn)這兩種小分子DNA的存在。 類型Ⅷ樣品采自海南呈曲葉癥狀的黃花捻，對(duì)病毒分離物Hn57的全基因組進(jìn)行了測(cè)定，序列分析表明Hn57與云南煙草曲葉病毒(TobaccoleafcurlYunnanvirus，TbLCYNV)的相似性最高，為71.0％，因而為雙生病毒的一個(gè)新種，命名為黃花捻曲葉病毒(Sidaleafcurlvirus，SiLCV)。在Hn57和Hn60中還發(fā)現(xiàn)伴隨有衛(wèi)星DNAβ和DNA1兩種小分

5、子，其中Hn57DNAβ和Hn60DNAβ之間的相似性為93.8％，它們與勝紅薊黃曲葉病害(Ageratumyellowleafcurldisease)伴隨的DNAβ(AYLCDβ02)的相似性最高，分別為51.5％和52.1％；Hn57DNA1和Hn60DNA1之間的核苷酸序列相似性為83.8％，與已報(bào)道的DNA1分子的相似性相對(duì)較高，為58.2～79.3％，而與矮縮病毒屬病毒(nanoviruses)僅具有21.9～34.0％的相似

6、性。 類型Ⅶ包括采自海南賽葵呈黃脈癥狀的6個(gè)樣品，對(duì)病毒分離物Hn36和Hn37進(jìn)行了全序列測(cè)定，序列分析表明，它們之間的序列相似性為99.1％，與賽葵黃脈病毒(Malvastrumyellowveinvirus，MYVV)的相似性最高，為81.3％和81.5％，因此是Begomovirus的一個(gè)新種，將其命名為賽葵黃花葉病毒(Malvastrumyellowmosaicvirus，MalYMV)。在MalYMV分離物中還發(fā)現(xiàn)伴

7、隨有DNAβ、DNA1、缺陷型DNAβ(defDNAβ)和重組DNAβ(RecDNA-Aβ)，這表明賽葵黃花葉病害可能是由MalYMV和其伴隨的小分子組成的病害復(fù)合體引起的。 類型Ⅵ采自呈曲葉癥狀的南瓜，對(duì)病毒分離物Hn61和G25的基因組測(cè)定發(fā)現(xiàn)，Hn61和G25是雙組分雙生病毒，含有DNA-A和DNA-B。全長(zhǎng)核苷酸序列比較表明，Hn61和G25DNA-A相似性為95.0％，DNA-B相似性為84.8％。Hn61和G25的兩