CGRP對(duì)大鼠急性心肌梗死后心臟干細(xì)胞募集及其治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的
　　急性心肌梗死后移植干細(xì)胞的治療作用已得到廣泛認(rèn)同,但細(xì)胞移植尚存在諸多問題,比如擴(kuò)增周期長、免疫排斥、存活率低、歸巢量少、不能與宿主細(xì)胞通訊等限制了細(xì)胞移植治療的應(yīng)用。而心臟自身的固有干細(xì)胞(CSC)的特性已在多項(xiàng)研究中得到證實(shí),若能尋找一種能夠原位激活或募集CSCs的藥物或因子,可能是一種干細(xì)胞治療心肌梗死的新途徑。降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)廣泛分布于血管系統(tǒng),多項(xiàng)研究證實(shí)其對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等具促增殖和遷移作

2、用,并且能上調(diào)體內(nèi)bFGF、IGF-1、HGF等能調(diào)控CSC生物學(xué)作用的生長因子。因此,我們設(shè)想:CGRP對(duì)CSCs是否有類似作用,其心血管保護(hù)作用是否與CSC有一定關(guān)聯(lián)呢?為了回答這一問題,本實(shí)驗(yàn)擬在大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,直接給予CGRP處理,觀察其對(duì)CSC是否具有募集作用,并初步探討其募集CSC的機(jī)制和對(duì)急性心肌梗死的治療作用。
　　方法
　　通過結(jié)扎左前降支建立大鼠急性心肌梗死模型。將104只健康SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、對(duì)

3、照組、CGRP組。假手術(shù)組僅開胸,不結(jié)扎前降支,對(duì)照組在梗死后給予PBS心肌內(nèi)注射,CGRP組在梗死后按10μg/㎏心肌內(nèi)注射CGRP。各組于3d、7d、14d、28d處死動(dòng)物,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)保證每組6只。取得標(biāo)本后,分別作HE、Masson染色、TTC染色觀察心臟形態(tài)學(xué)改變;超聲心動(dòng)圖檢測心功能;免疫組織化學(xué)觀察心肌內(nèi)血管新生;采用ELISA法檢測心肌組織內(nèi)VEGF水平;免疫熒光染色觀察CSC募集情況。
　　結(jié)果
　　1.術(shù)后

4、4周HE染色顯示假手術(shù)組心肌排列整齊有序,無瘢痕組織;對(duì)照組大量心肌消失,較多纖維瘢痕組織增生,排列紊亂;CGRP組瘢痕組織明顯比對(duì)照組少,有較多正常心肌細(xì)胞存留。Masson染色顯示,假手術(shù)組心肌細(xì)胞呈紅色,未見藍(lán)染之膠原纖維;對(duì)照組可見大量藍(lán)色膠原纖維,膠原纖維內(nèi)細(xì)胞核溶解消失,存活心肌細(xì)胞少;CGRP組膠原纖維較對(duì)照組明顯減少。
　　2.術(shù)后4周各組行超聲心動(dòng)圖檢測LVDd、LVDs、FS和EF值。結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,

5、對(duì)照組及CGRP組的LVDd和LVDs均增大,FS和EF減低;給予CGRP組較對(duì)照組以上心功能指標(biāo)明顯改善(P<0.05)。
　　3. TTC染色顯示,假手術(shù)組未見梗死區(qū),而對(duì)照組梗死面積較大,為(31.72±4.00)％;與對(duì)照組相比,CGRP組梗死面積明顯縮小,為(22.54±1.73)%(P<0.05)。
　　4.免疫組織化學(xué)染色計(jì)數(shù)各組新生微血管結(jié)果提示,心肌梗死后梗死周圍區(qū)毛細(xì)血管較假手術(shù)組增加(P<0.01),而

6、CGRP較對(duì)照組增加更明顯(P<0.01).
　　5. ELISA法檢測心肌組織VEGF水平,對(duì)照組和CGRP組較假手術(shù)組于3天即明顯升高,7天達(dá)高峰,14天下降,28天時(shí)降至假手術(shù)組水平。其中在3、7、14天, CGRP組VEGF水平較對(duì)照組明顯增加(P<0.05)
　　6.免疫熒光染色檢測CSC募集情況,結(jié)果提示,對(duì)照組和CGRP組CSC細(xì)胞數(shù)在第3天即增加,7天達(dá)高峰,14天明顯減少。其中,各時(shí)間點(diǎn)中對(duì)照組較假手術(shù)組C