非小細(xì)胞肺癌中ERCC1、DNA-PKcs的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、肺癌的發(fā)生是多因素、多基因參與的復(fù)雜過程，內(nèi)外環(huán)境致癌物所導(dǎo)致的DNA損傷得不到有效修復(fù)而引起基因突變的累積是肺癌發(fā)病的重要原因之一；肺癌放化療抵抗是肺癌術(shù)后預(yù)后不良的重要影響因素。DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)在修復(fù)基因、維持基因組穩(wěn)定性及拮抗癌變中起著重要作用。DNA修復(fù)因子的低表達(dá)或突變往往伴隨著基因不穩(wěn)定性增加，甚至是腫瘤惡性表型的產(chǎn)生，DNA修復(fù)因子的過表達(dá)可降低放化療的敏感性。 切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(Exsicion repa

2、ir cross-complement group 1，ERCC1)、DNA依賴性蛋白激酶催化亞單位(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit，DNA-PKcs)作為重要的DNA修復(fù)因子，可以修復(fù)DNA鏈內(nèi)交聯(lián)及DNA雙鏈斷裂損傷，與卵巢癌、食管癌及胃癌等的發(fā)病有關(guān)，而且均與肺癌主要化療藥順鉑的耐藥及腫瘤的放療敏感性降低有關(guān)，二者共同在肺癌中的表達(dá)情況及作用機(jī)制的研究國內(nèi)外均未見報(bào)道。

3、 本研究擬采取組織芯片技術(shù)及免疫組化SP法檢測ERCC1、DNA-PKcs在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，探討二者在肺癌發(fā)生發(fā)展及預(yù)后中的作用，以期為肺癌的個(gè)體化治療、預(yù)后判定提供有價(jià)值的分子檢測指標(biāo)。 材料和方法： 1、病例和標(biāo)本 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院1997年2月-2000年9月間手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的非小細(xì)胞肺癌石蠟標(biāo)本116例，男性85例，女性31例，中位年齡為57.5歲；所有病例術(shù)前均未接受過放化療

4、及免疫治療，隨訪時(shí)間截至2005年9月；取其中12例癌旁正常肺組織作為對(duì)照。 2、試劑 濃縮型鼠抗人ERCC1、DNA-PKcs單克隆抗體均購自美國Neomarkers公司，工作濃度為1:100;SP檢測試劑盒和DAB顯色液均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。 3、方法 應(yīng)用組織芯片技術(shù)和免疫組化SP法檢測肺癌組織及癌旁正常肺組織中ERCC1和DNA-PKcs的表達(dá)。組織芯片由上海芯超生物科技有限公司制作：染

5、色方法按SP免疫組化試劑盒說明書進(jìn)行，ERCC1和DNA-PKcs經(jīng)檸檬酸(PH=6.0)微波抗原修復(fù)。 4、結(jié)果判定 ERCCl、DNA-PKcs以胞核中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒定為陽性染色。每個(gè)組織點(diǎn)隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)。不著色或陽性細(xì)胞數(shù)≤10％定為陰性，陽性細(xì)胞數(shù)>10％定為陽性，每例均取兩點(diǎn)的平均值。 5、統(tǒng)計(jì)分析方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行

6、數(shù)據(jù)分析處理，各組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)。生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Meier法，采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、ERCC1、DNA-PKcs在NSCLC及正常肺癌組織中的表達(dá) ERCC1、DNA-PKcs在116例NSCLC組織中的陽性表達(dá)率分別為40.5％、75.0％，ERCCl在肺癌組織和癌旁正常組織的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.129)，而DNA-PKcs在癌組織中的表達(dá)明

7、顯高于癌旁正常肺組織(P=0.000)。 2、ERCC1、DNA-PKcs表達(dá)與患者一般狀況及臨床病理特征的關(guān)系 ERCC1的表達(dá)與肺癌分化程度、T分期和臨床分期呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，但與患者的性別、年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)(P>0.05)。DNA-PKcs的表達(dá)與臨床病理特征均無關(guān)。 3、ERCC1、DNA-PKcs表達(dá)的相關(guān)性 ERCC1、DNA-PKcs表達(dá)之間存在正相關(guān)(r=0.274

8、，P=0.003)。 4、ERCC1、DNA-PKcs表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系 預(yù)后較好的患者ERCC1的表達(dá)水平有高于預(yù)后較差者的趨勢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.014)。DNA-PKcs的表達(dá)與預(yù)后無關(guān)(P>0.05)多因素分析示ERCC1、DNA-PKcs不是影響預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。 結(jié)論： 1、分化程度高、腫瘤小和生存期長者，ERCC1相對(duì)高表達(dá)，所以ERCC1的檢測對(duì)預(yù)后評(píng)估有一定的指導(dǎo)價(jià)值；