黃芩苷納米結(jié)晶眼用原位凝膠的制備與評價.pdf

1、目的：
　　為了提高難溶性中藥有效成分黃芩苷的溶解度與溶出速度，并延長藥物在眼部的作用時間、改善治療效果，本研究制備黃芩苷納米結(jié)晶眼用原位凝膠，并對其進(jìn)行體內(nèi)外綜合評價；以確保制劑質(zhì)量可控、性能穩(wěn)定、安全有效，為相關(guān)新產(chǎn)品的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.眼用原位凝膠制劑的處方優(yōu)選以冷溶法和加熱溶解法制備凝膠溶液；轉(zhuǎn)子法測定相變溫度，觀測不同濃度凝膠溶液的流動性和膠凝能力；黏度計(jì)測定體系黏度值；分別以相變溫度、流動

2、性、黏度值、膠凝能力等為評價指標(biāo)，依次篩選溫度、pH、離子敏感型三種眼用原位凝膠體系的主材。采用沉淀法制備黃芩苷納米結(jié)晶；超聲法制備枸杞籽油微乳；流變儀測定黏附性材料、其他附加劑、不同藥物及載體加入后對各型眼用原位凝膠膠凝行為的的影響，優(yōu)選適宜眼用的最佳原位凝膠處方。
　　2.黃芩苷納米結(jié)晶眼用原位凝膠的制備及體內(nèi)外評價制備載黃芩苷納米結(jié)晶的離子型原位凝膠滴眼液，觀察外觀并在透射顯微鏡下考察微觀形態(tài)。分別考察評價凝膠的持水性和強(qiáng)度

3、。流變儀測定凝膠在非生理（室溫，未與人工淚液混合）狀態(tài)和生理狀態(tài)下（37℃，與人工淚液混合）的流變學(xué)曲線。建立高效液相色譜法（HPLC）作為黃芩苷納米結(jié)晶眼用原位凝膠的含量測定和體外釋放度的檢測方法；透析袋法測定體外釋放度，F(xiàn)ranz擴(kuò)散池法考察制劑的角膜透過性。拍照觀察兔眼給藥后凝膠（熒光素鈉染色）的局部滯留性能，通過兔眼單次、多次給藥實(shí)驗(yàn)評價凝膠的刺激性。建立大鼠實(shí)驗(yàn)性葡萄膜炎模型，初步評價黃芩苷納米結(jié)晶眼用原位凝膠的抗炎作用；觀察

4、不同放置條件下的穩(wěn)定性。
　　結(jié)果：
　　1.沉淀法制備的黃芩苷納米混懸液粒徑為258.6±21 nm（PI=0.153±0.014），離心富集后納米結(jié)晶粒徑為500.8±34 nm（PI=0.391±0.018），在透射電鏡下可以觀察到結(jié)晶大多為不規(guī)則塊狀。超聲法制備的枸杞籽油微乳為帶乳光的透明液體，粒徑為190±22 nm（PI=0.147±0.013），分布均勻。
　　以20％的P407和0.5%的P188為溫度

5、敏感型原位凝膠主材；黏附性材料MC、殼聚糖加入提高了體系相變溫度，HPMC和海藻酸鈉則相反；氯化鈉和甘露醇加入后體系相變溫度下降黏度值上升；枸杞多糖加入后體系相變溫度升高，黏度無變化；黃芩苷納米結(jié)晶和枸杞籽油微乳加入使體系相變溫度和黏度均上升；其他組份加入無明顯影響。
　　pH敏感型以0.4%的卡波姆934為主材；0.2%的HPMC為黏附性材料；氯化鈉、黃芩苷納米結(jié)晶和枸杞多糖及枸杞籽油微乳體系在生理?xiàng)l件下無法膠凝，枸杞籽油微乳和

6、枸杞多糖體系在非生理?xiàng)l件下黏度值略有增加。
　　離子敏感型以0.5%的結(jié)冷膠為主材；0.2%的海藻酸鈉為黏附性材料；苯扎氯銨、甘露醇、枸杞多糖和槐定堿及黃芩苷納米結(jié)晶加入對體系黏度值無明顯影響，氯化鈉和枸杞籽油微乳加入后黏度值不同程度增大。
　　最終選擇離子敏感型原位凝膠體系用于眼部給藥：以0.5%的結(jié)冷膠為主要凝膠基質(zhì)；0.2%的海藻酸鈉為黏附性材料；滲透壓調(diào)節(jié)劑為5%的甘露醇；抑菌劑為0.02%的苯扎氯銨；藥物為1%的黃

7、芩苷納米結(jié)晶。
　　2.凝膠液與淚液混合后形成的空白凝膠呈半固體狀；空白凝膠液中加入黃芩苷納米結(jié)晶后為淡黃色混懸液，與淚液混合后形成凝膠；透射電鏡下觀察到凝膠為相互堆積纏繞的不規(guī)則塊狀。凝膠液在生理?xiàng)l件下膠凝后，離心30 min后凝膠的持水率仍在85%以上；恒溫振蕩下凝膠溶解時間為52±2.1 min。非生理?xiàng)l件下剪切應(yīng)力隨剪切速率變化呈線性，生理?xiàng)l件下黏度值隨剪切率變化趨勢表明凝膠為假塑性流體。
　　采用HPLC法在280

8、 nm處檢測黃芩苷，陰性樣品無干擾；精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均良好，平均回收率為100.85%。體外釋放結(jié)果表明10 h藥物完全釋放，具有一定的緩釋效果。納米結(jié)晶原位凝膠角膜透過率高于黃芩苷滴眼液。
　　眼部滯留考察結(jié)果中普通滴眼液組22 min時已無明顯黃色熒光，凝膠組35 min仍有熒光殘留。兔眼單次和多次給藥均無刺激性，多次給藥后角膜病理切片無損傷。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示原位凝膠組在炎癥反應(yīng)4 h和8 h的兔眼房水蛋白含量均低于滴