河北省漢坦病毒宿主動(dòng)物攜帶病毒特性與種群遺傳特性分析研究.pdf

1、目的：了解河北省腎綜合征出血熱疫源地鼠種構(gòu)成、帶毒率及宿主動(dòng)物所攜帶漢坦病毒與種群遺傳特性間的關(guān)系，指導(dǎo)對(duì)本病的預(yù)防和控制。
　　 方法：
　　 1.疫源地調(diào)查，夾夜法捕鼠，無菌取鼠肺；
　　 2.用冷凍切片機(jī)切鼠肺，冷丙酮固定，間接免疫熒光法篩選漢坦病毒陽性鼠肺；
　　 3.從陽性和陰性鼠肺中提取鼠基因組DNA；
　　 4.根據(jù)文獻(xiàn)以及GENEBANK中已知的微衛(wèi)星位點(diǎn)查找特異性引物，用聚合酶鏈

2、反應(yīng)（PCR）進(jìn)行擴(kuò)增，并進(jìn)行電泳和觀察結(jié)果；
　　 5.根據(jù)電泳結(jié)果顯示，比較同一地區(qū)和不同地區(qū)陰性陽性標(biāo)本間的差異，并根據(jù)相似系數(shù)計(jì)算不同地區(qū)間種群的親緣關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.2008年的鼠間疫情資料顯示褐家鼠占總捕獲鼠種的70.39％，是河北省的優(yōu)勢(shì)鼠種。河北省居民區(qū)鼠種主要為褐家鼠和小家鼠，分別占居民區(qū)總捕獲鼠種的73.38％和24.10％；野外鼠種主要為褐家鼠、大倉鼠和小家鼠，分別占野外總捕獲

3、鼠種的54.72％、20.75％和13.21％。河北省居民區(qū)鼠密度為2.16％，高于野外鼠密度（0.53％）。
　　 2.將331份鼠肺冷凍切片，冷丙酮固定后用間接免疫熒光法檢測(cè)，陽性鼠肺共1份，陽性率為0.30％。提示我省腎綜合征出血熱疫源地鼠帶毒率較低，帶毒鼠為宅區(qū)褐家鼠，野外及其它鼠種未檢出。
　　 3.通過對(duì)同一地區(qū)攜帶與未攜帶漢坦病毒的褐家鼠間微衛(wèi)星擴(kuò)增結(jié)果比較得出，D4mit20、D16mit4和D18mit

4、1三個(gè)位點(diǎn)均不穩(wěn)定，但D16mit4位點(diǎn)擴(kuò)增出的條帶在唐山地區(qū)穩(wěn)定存在，D18mit1位點(diǎn)僅可在滄州地區(qū)的陽性標(biāo)本上擴(kuò)增出條帶，D2mit12、D3mit15、D3mit22、D7mit26、D12wox10、D12wox11和D14mit2這7個(gè)位點(diǎn)上陽性與陰性標(biāo)本的擴(kuò)增結(jié)果未顯現(xiàn)出明顯差別。
　　 4.通過對(duì)同一地區(qū)未攜帶漢坦病毒的褐家鼠間微衛(wèi)星擴(kuò)增結(jié)果比較得出，D4mit20、D16mit4和D18mit1三個(gè)位點(diǎn)極不穩(wěn)定

5、，但偶爾會(huì)出現(xiàn)，不能作為遺傳特征的標(biāo)記位點(diǎn)；D2mit12、D7mit26和D12wox10三個(gè)位點(diǎn)在各地區(qū)內(nèi)比較穩(wěn)定且發(fā)生變異??；D3mit15、D3mit22、D12wox11和D14mit2四個(gè)位點(diǎn)在各地區(qū)內(nèi)遺傳變異大，表現(xiàn)出多態(tài)性，鼠個(gè)體間存在遺傳差別。
　　 5.通過對(duì)不同地區(qū)未攜帶漢坦病毒的褐家鼠間微衛(wèi)星擴(kuò)增結(jié)果比較得出，褐家鼠在D3mit15、D12wox10、D12wox11和D14mit2位點(diǎn)上存在地區(qū)間差異，

6、表明不同地區(qū)的褐家鼠在遺傳上存在差別，其余微衛(wèi)星位點(diǎn)未顯示出差別。經(jīng)過比較相似系數(shù)發(fā)現(xiàn)，邯鄲與保定、石家莊與唐山、滄州與邯鄲的褐家鼠種群間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，遺傳距離較大。滄州與唐山的相似系數(shù)為0.8，親緣關(guān)系較近。
　　 6.通過對(duì)不同地區(qū)攜帶漢坦病毒的褐家鼠間微衛(wèi)星擴(kuò)增結(jié)果比較得出，D16mit4位點(diǎn)在唐山地區(qū)的標(biāo)本上擴(kuò)增出條帶；D18mit1位點(diǎn)在滄州標(biāo)本上也可以擴(kuò)增出條帶，但不穩(wěn)定；D2mit12、D3mit22、D12wox

7、10和D14mit2位點(diǎn)上各地區(qū)標(biāo)本擴(kuò)增出的條帶電泳位置一致，呈單態(tài)性，這三個(gè)地區(qū)間的陽性標(biāo)本在這些位點(diǎn)上無差異；D7mit26、D12wox11和D3mit15位點(diǎn)在三個(gè)地區(qū)擴(kuò)增結(jié)果穩(wěn)定，但表現(xiàn)出多態(tài)性；D4mit20位點(diǎn)擴(kuò)增結(jié)果穩(wěn)定，但與預(yù)期結(jié)果不符。經(jīng)過比較相似系數(shù)發(fā)現(xiàn)，唐山、滄州和保定三個(gè)地區(qū)攜帶有漢坦病毒的褐家鼠在這十個(gè)位點(diǎn)上的遺傳距離不大，親緣關(guān)系較近。
　　 結(jié)論：
　　 1.褐家鼠、小家鼠是河北省居民區(qū)主

8、要鼠種，褐家鼠、大倉鼠和小家鼠是野外主要鼠種。褐家鼠是河北省的優(yōu)勢(shì)鼠種，并且是腎綜合征出血熱的主要傳染源。
　　 2.經(jīng)過對(duì)攜帶漢坦病毒和未攜帶漢坦病毒的褐家鼠在十個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的比較，未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在明顯差別，還不能說明褐家鼠感染漢坦病毒與其遺傳因素有關(guān)。
　　 3.通過計(jì)算相似系數(shù)得出，滄州與唐山的褐家鼠親緣關(guān)系較近；邯鄲與保定、邯鄲與滄州、石家莊與唐山間的褐家鼠親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，遺傳距離大。不同地區(qū)的褐家鼠存在遺傳上的