低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白對人臍靜脈內(nèi)皮細胞凝血酶調(diào)節(jié)蛋白、內(nèi)皮細胞蛋白C受體表達的影響.pdf

1、研究目的： 通過不同培養(yǎng)條件下人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)的培養(yǎng)，探索脂蛋白對細胞存活、TM、EPCR表達的影響。 研究方法： 1．從人臍帶中提取HUVEC，進行體外培養(yǎng)。 2．在HUVEC培養(yǎng)液中加入不同濃度的LDL、OX-LDL、HDL，培養(yǎng)不同的時間。 3．用MTT法測定HUVEC的存活量。 4．取培養(yǎng)液用

2、ELISA試劑盒測上清中的sTM、sEPCR；固定培養(yǎng)板上的細胞，用細胞ELISA法測定細胞膜上的TM、EPCR；提取 mRNA，RT-PCR后進行紫外熒光顯像，以TM、EPCR與β-actin的mRNA比值進行半定量分析。 研究結(jié)果： 1．LDL和OX-LDL對HUVEC存活有抑制作用，作用24h，此抑制作用呈濃度依賴性。HDL對HUVEC存活無明顯影響。 2．LDL和OX-LDL能使上清中sTM量增加，在25

3、～75μg/ml范圍內(nèi)呈濃度依賴性；LDL能使細胞膜上TM量增加，在25～75μg/ml范圍內(nèi)呈濃度依賴性；OX-LDL能使細胞膜上TM減少，在50～100 μg/ml范圍內(nèi)呈濃度依賴性；HDL對上清中sTM和細胞膜上TM無明顯影響。 3．LDL和OX-LDL能使上清中sEPCR減少，在25～100μg/ml范圍內(nèi)呈濃度依賴性，對細胞膜上EPCR無明顯影響；HDL能使上清中sEPCR和細胞膜上EPCR增加，在25～100μg/m

4、l范圍內(nèi)呈濃度依賴。 4．LDL、OX-LDL可能能上調(diào)HUVEC TM mRNA的表達，下調(diào)EPCR mRNA的表達；HDL可能對HUVEC TMmRNA表達無明顯影響，可能能上調(diào)EPCR mRNA的表達，但均不明顯。 結(jié)論： 1．LDL和OX-LDL對HUVEC的存活有一定程度的抑制作用，而 HDL對HUVEC的存活無明顯影響。 2．LDL和OX-LDL能刺激HUVEC釋放TM，LDL刺激細胞膜上TM