抗人T淋巴細(xì)胞CD4人-鼠嵌合抗體真核表達(dá)的研究.pdf

1、CD4屬于Ig超家族，為細(xì)胞膜表面單鏈糖蛋白，是HIV的主要受體。CD4+T細(xì)胞參與大多數(shù)自身免疫性疾病的發(fā)生，而抗CD4的抗體可清除或抑制CD4+T細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)異常的T細(xì)胞應(yīng)答。國外已對鼠源性抗CD4單抗用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病進(jìn)行了廣泛而深入的研究，臨床療效良好。但是，鼠源性單抗應(yīng)用于人體治療將引起人抗鼠抗體(HAMA)反應(yīng)，反復(fù)使用可導(dǎo)致人體產(chǎn)生過敏反應(yīng)且降低治療效果，將鼠單抗改造為人-鼠嵌合抗體能

2、降低HAMA反應(yīng)。嵌合抗體臨床試用的大量研究表明，它臨床療效好，免疫原性與其它人源化抗體相似，而親和力常常高于其它人源化抗體。 本研究首先對質(zhì)粒PAG4622+CD4VL和PAH4604+CD4VH進(jìn)行雙酶切及DNA測序鑒定，證實(shí)其為含有鼠源性可變區(qū)和人源恒定區(qū)的嵌合抗體輕、重鏈表達(dá)載體。然后，繪制SP2/0細(xì)胞生長曲線確定SP2/0細(xì)胞最適生長條件，并通過抗生素篩選SP2/0細(xì)胞濃度的摸索，確定了組胺醇、霉酚酸聯(lián)合篩選對SP2

3、/0細(xì)胞的最低致死量為3.5mmol/L+1.1ug/ml。接著，采用電穿孔轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA的方法，將制備好的線性質(zhì)粒PAH4604+CD4VH和PAG4622+CD4VL共轉(zhuǎn)染SP2/0細(xì)胞，通過組胺醇、霉酚酸聯(lián)合篩選4～6周，獲得了0925CASP2/0和1107CASP2/0兩株陽性SP2/0細(xì)胞株。最后，通過ELISA、流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR和DNA測序的方法對0925CASP2/0和1107CASP2/0細(xì)胞進(jìn)行了初步鑒定。結(jié)