Girdin在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其對(duì)肝癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響.pdf

1、目的:探討Girdin在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)情況及臨床意義;探討特異性RNA干擾人肝細(xì)胞癌細(xì)胞中Girdin的表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖、侵襲的影響。
　　方法:
　　(1)采用免疫組化SP法檢測(cè)肝癌組織芯片內(nèi)40例原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織、30例癌旁組織中Girdin的表達(dá)，分析肝癌組織中Girdin的表達(dá)水平與臨床病理因素及預(yù)后之間的關(guān)系。
　　(2)設(shè)計(jì)并合成特異性針對(duì)Girdin的小干擾RNA序列(Girdin-siRNA)，

2、通過脂質(zhì)體LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染HepG2和Huh7.5.1細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)檢測(cè)干擾序列對(duì)細(xì)胞Girdin mRNA表達(dá)的影響;MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖并繪制生長曲線;Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:
　　(1) Girdin在肝癌中陽性表達(dá)率為100％，高于癌旁組織43.3％(P＜0.001)。Girdin表達(dá)與

3、肝癌患者的腫瘤大小、T分期、TNM分期及Edmondson-Steiner分級(jí)相關(guān)(P＜0.05）。Girdin低表達(dá)組1年、3年生存率分別為100％、76.9％，明顯高于Girdin高表達(dá)組的59.3％、14.8％，兩組患者生存率比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001)。單因素分析顯示肝癌患者總生存率與腫瘤位置、腫瘤大小、是否有血管侵犯、T分期、TNM期、Edmondson-Steiner分級(jí)及Girdin表達(dá)水平相關(guān)(P＜0.05)。

4、多因素分析顯示腫瘤位置、TNM分期、Edmondson-Steiner分級(jí)及Girdin表達(dá)水平可能是肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。
　　(2) Real time-PCR結(jié)果表明特異性針對(duì)Girdin的小干擾RNA序列可以抑制HepG2和Huh7.5.1細(xì)胞中Girdin的表達(dá)。MTT結(jié)果顯示Girdin siRNA組細(xì)胞的生長速度明顯低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P＜0.01)。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Gir

5、din siRNA組細(xì)胞的侵襲能力弱于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　(1) Girdin蛋白在肝癌組織中表達(dá)明顯增高;肝癌組織中的Girdin表達(dá)水平與腫瘤大小、T分期、TNM分期、Edmondson-Steiner分級(jí)正相關(guān);Girdin表達(dá)可能是原發(fā)性肝細(xì)胞癌不良預(yù)后的參考指標(biāo)。
　　(2)特異性針對(duì)Girdin的siRNA序列可以有效地抑制HepG2和Huh7.5.1細(xì)胞的增殖及侵襲能