MicroRNa-182對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)展,預(yù)后以及細(xì)胞遷移能力的研究.pdf

1、目的:
　　 檢測(cè)microRNA-182(miR-182)在結(jié)直腸癌與相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)，并評(píng)估其在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展和預(yù)后中的價(jià)值。此外，進(jìn)一步檢測(cè)miR-182在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中的表達(dá)并與非轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)相比較，并用體外實(shí)驗(yàn)探討其對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移能力的影響，進(jìn)而評(píng)估m(xù)iR-182在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用。
　　 方法:
　　 1.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)173對(duì)結(jié)直腸癌（包括148例非轉(zhuǎn)移癌，25例轉(zhuǎn)

2、移癌）與對(duì)應(yīng)癌旁組織miR-182的表達(dá)情況。
　　 2.用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)或Kruskal-Wallis檢驗(yàn)來評(píng)估m(xù)iR-182表達(dá)情況與結(jié)直腸癌病人臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系。
　　 3.以Kaplan-Meier法描述miR-182及其它參數(shù)的生存曲線，并用對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)(log-ranktest)比較各生存曲線之間的差異。
　　 4.用COX相對(duì)危險(xiǎn)回歸法分析miR-182及其它參數(shù)在結(jié)直腸癌中的預(yù)

3、后價(jià)值。
　　 5.體外用脂質(zhì)體2000(lipofectamineTM2000)將miR-182模擬物及陰性對(duì)照瞬時(shí)轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌HT-29細(xì)胞，并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染效率。
　　 6.用transwell小室實(shí)驗(yàn)觀察各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移數(shù)，來研究miR-182對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞HT-29遷移能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.結(jié)直腸癌組織中miR-182的表達(dá)水平顯著高于對(duì)應(yīng)癌旁組織(p＜0.00

4、1)，轉(zhuǎn)移性癌組織miR-182的表達(dá)顯著高于非轉(zhuǎn)移癌(p=0.0166)。
　　 結(jié)果顯示miR-182在不同組織中的表達(dá)差異較大，在148對(duì)非轉(zhuǎn)移結(jié)直腸癌組織中的相對(duì)表達(dá)量是0.147(0.075-0.277){中位數(shù)（四分位數(shù)）），其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量是0.051(0.019-0.117){中位數(shù)（四分位數(shù)））;另外miR-182在25對(duì)轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌組織中的相對(duì)表達(dá)量是0.254(0.134-0.538){中位數(shù)

5、（四分位數(shù)）），其對(duì)應(yīng)癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量是0.045(0.014-0.131){中位數(shù)（四分位數(shù)））。
　　 2.結(jié)直腸癌組織miR-182表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系
　　 結(jié)直腸癌患者組織miR-182表達(dá)水平與患者的腫瘤大小(p=0.016)，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.008)和臨床分期(p=0.020)密切相關(guān)，而與患者的年齡、性別、腫瘤類型、腫瘤浸潤(rùn)程度和分化程度無(wú)關(guān)(p＞0.05)。
　　 3.

6、結(jié)直腸癌組織miR-182表達(dá)水平與患者生存時(shí)間相關(guān)
　　 隨訪的148例結(jié)直腸癌患者中，五年總體生存率為56.8％，根據(jù)miR-182在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的中位數(shù)分成高表達(dá)組和低表達(dá)組，其中miR-182高表達(dá)組的五年生存率為43.2％，miR-182低表達(dá)組的五年生存率為70.3％，可見miR-182高表達(dá)組的生存率顯著低于低表達(dá)組(p=0.001)。通過Kaplan-Meier生存曲線分析顯示結(jié)直腸癌患者的生存時(shí)間還與腫瘤

7、浸潤(rùn)程度(p=0.022)，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p＜0.001)和臨床分期(p＜0.001)密切相關(guān)，而與患者的年齡、性別、腫瘤類型、腫瘤大小和分化程度無(wú)關(guān)(p＞0.05)。
　　 4.COX相對(duì)危險(xiǎn)回歸法結(jié)果顯示miR-182表達(dá)水平是結(jié)直腸癌患者獨(dú)立的預(yù)后因素
　　 COX相對(duì)危險(xiǎn)回歸法單因素分析顯示，結(jié)直腸癌組織中miR-182表達(dá)水平(HR=2.313;95％CI，1.379-3.879;p=0.001)，腫瘤浸潤(rùn)程

8、度(HR=2.214;95％CI，1.094-4.483;p=0.027)，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=3.523;95％CI，2.105-5.899;p＜0.001)和臨床分期(HR=2.975;95％CI1.943-4.555;p＜0.001)都與結(jié)直腸癌患者預(yù)后相關(guān);COX相對(duì)危險(xiǎn)回歸法多因素分析顯示，miR-182表達(dá)水平(HR=1.790;95％CI，1.057-3.032;p=0.030)和局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(HR=2.899;95％

9、CI，1.704-4.933;p＜0.001)是結(jié)直腸癌患者的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　 5.Transwell小室實(shí)驗(yàn)表明miR-182能夠促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞HT-29的遷移能力
　　 HT-29細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-182模擬物24小時(shí)后，其表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高(p＜0.05）。MiR-182過表達(dá)的HT-29細(xì)胞遷移數(shù)(61±9)顯著高于陰性對(duì)照組(29±5)(p＜0.05)和空白對(duì)照組(27±4)(p＜0.05)。

10、　　 結(jié)論:
　　 1.MiR-182在結(jié)直腸癌中高表達(dá)，并且與患者的腫瘤大小，局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，提示其在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
　　 2.MiR-182高表達(dá)組的生存率顯著低于低表達(dá)組，并且COX相對(duì)危險(xiǎn)回歸法結(jié)果顯示miR-182水平是結(jié)直腸癌患者獨(dú)立的預(yù)后因素，提示其可作為結(jié)直腸癌患者的一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后分子和潛在治療靶點(diǎn)。
　　 3.MiR-182在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中高表達(dá)，且高