不同fimA基因型牙齦卟啉單胞菌在青春期齦炎患者中的分布及超微結(jié)構(gòu)觀察.pdf

1、目的:本研究根據(jù)編碼牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)主要毒力因子菌毛亞基-菌毛素fimA基因遺傳多態(tài)性，采用16SrRNA聚合酶鏈反應(yīng)(PolmeraseChainReaction，PCR)檢測青春期齦炎患者和青春期牙周健康者齦下菌斑中的P.gingivalis，運(yùn)用fimA引物特異性PCR對已檢出的P.gingivalis陽性標(biāo)本進(jìn)行fimA基因分型，并對各型菌株進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀

2、察，旨在探查各fimA基因型P.gingivalis在青春期齦炎患者和青春期牙周健康者中的分布，并根據(jù)觀察的各fimA基因型P.gingivalis超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)探討其致病性差異的結(jié)構(gòu)機(jī)制。 材料與方法:研究對象入選者97例，其中青春期齦炎患者51例，青春期牙周健康者46例。選取切牙和第一磨牙為菌斑取樣部位。選取前期培養(yǎng)的脫脂牛奶保存的P.gingivalis臨床野生菌株，作為擬觀察超微結(jié)構(gòu)的待檢菌體。 常規(guī)酚-氯仿法提取

3、齦下菌斑中全細(xì)菌及各菌體DNA。紫外分光光度儀測定DNA濃度。用P.gingivalis16SrRNA和各fimA基因型特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，2.0％瓊脂糖凝膠水平電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物，在預(yù)期片段上出現(xiàn)條帶為陽性，否則為陰性。對檢出的各fimA基因型P.gingivalis制備超薄切片，在透射電鏡下觀察菌體表面結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。用SPSS11.5統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，χ2檢驗分析P.gingivalis在青春期齦炎組和青春期牙周健康組齦下菌斑

4、中檢出率的差異，CochranArmitage趨勢檢驗分析齦炎組和健康組P.gingivalis檢出率隨年齡變化的趨勢，檢驗標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。所有實驗樣本的測定均在盲法下進(jìn)行，并隨機(jī)抽取10％的樣本做重復(fù)性實驗，檢測PCR結(jié)果的可靠性。結(jié)果:1、青春期齦炎患者齦下菌斑中P.gingivalis檢出率為74.5％，青春期牙周健康者中為30.4％，兩組檢出率的差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；對P.gingivalis檢出率隨年齡增加

5、而增加的趨勢進(jìn)行χ2檢驗，結(jié)果在齦炎組(P＜0.05)和健康組(P＜0.01)均具有統(tǒng)計學(xué)意義。 2、在青春期齦炎患者和青春期牙周健康者齦下菌斑中均檢出多種fimA基因型P.gingivalis。在齦炎組各fimA基因型P.gingivalis的總檢出率：Ⅰ型34.2％，Ⅱ型55.3％，Ⅳ型18.4％，Ⅲ型和Ⅴ型未檢出；另有7例(占18.4％)未分出型別。在健康組各fimA基因型P.gingivalis的總檢出率：Ⅰ型14.3％

6、Ⅱ型85.7％，Ⅲ型14.3％，Ⅳ型28.6％，Ⅴ型未檢出；另有2例(占14.3％)未分出型別。 3、fimA基因Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型P.gingivalis的菌毛存在差別：Ⅰ型和Ⅱ型菌體表面有放射狀菌毛，Ⅱ型略顯致密，Ⅳ型表面未見明顯菌毛。同時也觀察到各型莢膜存在差別：Ⅰ型莢膜最厚，Ⅳ型莢膜較薄，Ⅱ型莢膜最薄。 結(jié)論:1、P.gingivalis與青春期齦炎有關(guān)。 2、P.gingivalis檢出率在青春期隨年齡增

7、長有增高趨勢。 3、青春期齦炎患者和青春期牙周健康者齦下菌斑中P.gingivalis存在fimA基因多態(tài)性。fimA基因Ⅱ型是其主要存在的基因型，其次是Ⅰ型和Ⅳ型，Ⅲ型和Ⅴ型較少或不能檢出。 4、青春期齦炎患者和青春期牙周健康者齦下菌斑中存在按現(xiàn)有fimA基因分型未能定型的P.gingivalis菌株。 5、fimA基因Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型P.gingivalis的菌毛和莢膜存在較大差別，推測其粘附、侵入或其它致病