黃瓜組織培養(yǎng)及再生植株的研究.pdf

1、黃瓜(CucumissativusL.)，屬葫蘆科甜瓜屬1年生攀緣草本植物，具有產(chǎn)量高、效益好等特點(diǎn)，栽培面積和消費(fèi)量很大，是世界各國普遍栽培的重要蔬菜作物之一。組織培養(yǎng)是黃瓜進(jìn)行無性繁殖和種質(zhì)資源保存的有效途徑，也是進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化研究的基礎(chǔ)，組織培養(yǎng)過程中產(chǎn)生體細(xì)胞無性系變異的特點(diǎn)可為黃瓜抗性育種和多倍體育種創(chuàng)造新的有價(jià)值的種質(zhì)資源。本論文以黃瓜ND420、ND105、ND226、國農(nóng)14號(hào)和國農(nóng)22號(hào)為試料，對(duì)影響黃瓜組織培養(yǎng)的諸因素

2、進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，建立了黃瓜離體子葉愈傷途徑、離體子葉節(jié)直接不定芽途徑和離體真葉胚狀體途徑再生體系，獲得再生植株，其中離體子葉節(jié)再生體系為最優(yōu)的高效再生體系，主要結(jié)果如下： 1以黃瓜子葉為材料，誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織及不定芽，建立再生體系。篩選出了適于愈傷組織及不定芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基MS+1.0mg·L-1BAP+0.05～0.1mg·L-1NAA+3.0％蔗糖+0.6％瓊脂。愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到75％以上，不定芽誘導(dǎo)率22％左右。植物

3、激素、基因型、外植體及接種方式對(duì)黃瓜子葉不定芽誘導(dǎo)有較大影響。1～3d齡子葉以近軸端垂直插入培養(yǎng)基的接種方式最有利于不定芽誘導(dǎo)。適宜濃度的硝酸銀(2～4mg·L-1)和脫落酸(0.5mg·L-1)可促進(jìn)3～5d齡子葉不定芽誘導(dǎo)。光照時(shí)間也對(duì)不定芽誘導(dǎo)有影響，光周期15h·d-1和10h·d-1及遮光時(shí)間0d和3d的不定芽誘導(dǎo)率較高。 2以黃瓜子葉節(jié)為材料，誘導(dǎo)直接不定芽，建立高頻再生體系。篩選出直接不定芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基MS+0.

4、5mg·L-1BAP+3.0％蔗糖+0.6％瓊脂，直接不定芽誘導(dǎo)率達(dá)90％～100％。外植體大小對(duì)誘導(dǎo)率影響很大，單片完整子葉大小的子葉節(jié)為最佳外植體。2.0mg·L-1硝酸銀促進(jìn)直接不定芽的誘導(dǎo)。光照時(shí)間較短的光周期處理和遮光時(shí)間較長的處理能顯著促進(jìn)黃瓜子葉節(jié)直接不定芽的伸長。 3以黃瓜真葉為材料，誘導(dǎo)胚性愈傷及胚狀體，建立再生體系。胚性愈傷誘導(dǎo)最適宜激素組合是MS+2.0mg·L-12,4-D+1.0mg·L-1BAP+0.

5、5mg·L-1NAA+6.0％蔗糖+0.6％瓊脂，胚狀體誘導(dǎo)最適宜激素組合是MS+1.0mg·L-1BAP+0.5mg·L-1NAA+6.0％蔗糖+0.6％瓊脂，胚狀體形成培養(yǎng)基是不加激素的MS+3.0％蔗糖+0.6％瓊脂，胚性愈傷和胚狀體誘導(dǎo)率達(dá)到60％左右。ND105的最適宜胚狀體誘導(dǎo)外植體為子葉，ND420和國農(nóng)14號(hào)的最適宜胚狀體誘導(dǎo)外植體為真葉。胚性愈傷誘導(dǎo)階段較高濃度(6.0％)蔗糖和適宜濃度(2.0mg·L-1)脫落酸及赤