MicroRNA-106a在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用及其機制.pdf

1、[目的]:
　　轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的顯著特點，也是造成結(jié)直腸癌(colorectalcancer，CRC)患者臨床治療失敗的主要原因。雖然，近年來在結(jié)腸癌的診斷和治療模式上取得了可喜的進展，但結(jié)直腸癌的5年生存率仍徘徊在40％左右，仍有近50％的患者死于腫瘤進展和遠處轉(zhuǎn)移。如何預(yù)防及有效治療遠處轉(zhuǎn)移，仍然是目前最值得臨床關(guān)注的問題之一。microRNAs(miRNAs)是一類非編碼的單鏈小RNA，可以在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控多種基因的表達，故

2、可調(diào)控細胞多種生物學(xué)功能。研究表明，許多miRNAs參與了人類惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，作為癌基因或抑癌基因而發(fā)揮多種生物學(xué)功能。而作為內(nèi)源性小分子，以miRNAs為基礎(chǔ)的針對結(jié)直腸癌預(yù)防及治療具有更高的穩(wěn)定性和組織相容度，更低的毒副作用，可能成為新的治療策略。我們希望通過本研究，探討miR-106a在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移侵襲過程中的調(diào)控作用，并以此為基礎(chǔ)尋找抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的新型靶點，為腫瘤治療提供新的路徑。
　　[材料與方法]:
　　(1

3、)RealtimeRT-PCR的方法檢測miR-106a在50例結(jié)腸癌組織以及5種結(jié)腸癌細胞株(HT29，SW620，LOVO，SW1116，W480)與永生化腸上皮細胞NCM460中的表達，并進一步分析miR-106a表達水平與結(jié)腸癌細胞侵襲遷移能力以及結(jié)腸癌患者5年生存率之間的關(guān)系。
　　(2)通過轉(zhuǎn)染miR-106ainhibitor或miR-106a逆轉(zhuǎn)錄病毒過表達載體分別下調(diào)SW480細胞或上調(diào)HT29細胞miR-106

4、a表達水平，體外實驗觀察miR-106a表達改變對2種結(jié)腸癌細胞株侵襲、遷移及增殖能力的影響;體內(nèi)試驗觀察miR-106a對移植瘤成瘤及浸潤能力的影響。
　　(3)生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測miR-106a靶基因，然后結(jié)合雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)，RealtimeRT-PCR和免疫印跡的方法，篩選并驗證miR-106a的靶基因，初步明確miR-106a的發(fā)揮生物學(xué)作用的分子機制。
　　[結(jié)果]:
　　(1)Real-timeRT

5、-PCR檢測結(jié)果顯示在50例結(jié)直腸癌組織中，伴有轉(zhuǎn)移組結(jié)直腸癌組織（22例）中miR-106a表達水平顯著高于無轉(zhuǎn)移組結(jié)直腸癌組織(28例);miR-106a表達較高組（25例）的5年無轉(zhuǎn)移生存率相較于低表達miR-106a組（25例）明顯減低;5種結(jié)腸癌細胞中miR-106a表達水平均比人永生化腸上皮細胞(NCM-460)高，5種結(jié)腸癌細胞內(nèi)miR-106a的表達水平與腫瘤細胞侵襲能力呈正相關(guān)。
　　(2)成功構(gòu)建了miR-10

6、6a的過表達載體并包裝成病毒，篩選出穩(wěn)定過表達miR-106a的結(jié)腸癌細胞系HT29/retro-miR-106a，Rea1-timeRT-PCR檢測顯示miR-106a在HT29/retro-miR-106a細胞中的表達較對照組明顯升高。
　　(3)抑制miR-106a表達水平能有效抑制SW480細胞遷移及侵襲，但對細胞增殖無影響;HT29/retro-miR-106a細胞的體外侵襲、遷移能力明顯增強，而細胞增殖能力與對照組無差

7、異，在裸鼠體內(nèi)，HT29/retro-miR-106a細胞的成瘤能力與對照組無差異，但移植瘤侵襲能力明顯增強。
　　(4)生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)合靶基因功能分析，篩選出miR-106a的一個潛在靶基因TGFBR2。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)檢測進一步證實了該靶序列，Real-timeRT-PCR及Immunoblot證實miR-106a可以抑制TGFBR2mRNA及蛋白的表達。
　　[結(jié)論]:
　　miR-106a在伴轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌