抑制性消減雜交和cDNA微陣列技術(shù)研究星星草耐鹽機(jī)理.pdf

1、星星草是一種有較強(qiáng)耐鹽堿能力的植物，是松嫩平原鹽堿地的優(yōu)勢(shì)植物之一。為研究星星草的耐鹽堿機(jī)理，以400mMNaHCO3處理后6h、12h、24h和48h的星星草葉片為T(mén)ester，以非脅迫葉片為Driver，分別構(gòu)建了4個(gè)抑制性消減文庫(kù)，對(duì)文庫(kù)克隆測(cè)序并進(jìn)行了表達(dá)序列標(biāo)簽(EST)分析。用獲得的基因序列構(gòu)建了星星草cDNA微陣列，用微陣列研究了NaHCO3脅迫下不同時(shí)間星星草基因的表達(dá)。 PCR檢測(cè)和序列測(cè)定顯示，4個(gè)抑制性消減

2、文庫(kù)的插入片段的平均長(zhǎng)度為302bp。從文庫(kù)中隨機(jī)挑選1964個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序，去除載體序列、polyA/T、低質(zhì)量重復(fù)序列和短于100bp的序列以及合理序列編輯后，共獲得了1775條高質(zhì)量的cDNA序列，它們的GenBank登錄號(hào)為EB104056-EB105830。 將各個(gè)消減文庫(kù)ESTs進(jìn)行功能注釋，并根據(jù)MIPS分類標(biāo)準(zhǔn)分別進(jìn)行分類。這些基因主要分為代謝、光合作用、防御、轉(zhuǎn)運(yùn)、信號(hào)傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白合成和再生、新基因等類

3、群。結(jié)果顯示NaHCO3脅迫下的不同時(shí)間，基因表達(dá)發(fā)生了明顯的變化。例如，細(xì)胞防御類基因序列在NaHCO3脅迫48h和6h文庫(kù)中表達(dá)量最為豐富，分別占文庫(kù)總克隆數(shù)的10％和8％，而在NaHCO3脅迫24h的文庫(kù)中，該類基因只占文庫(kù)的2％；轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)類基因在6h和48h文庫(kù)所占4％，而在12h和24h文庫(kù)中僅分別為2％和1％；蛋白降解和循環(huán)類基因和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)基因在48h文庫(kù)中占8％，而它們?cè)?4h文庫(kù)中所占比只有2％，說(shuō)明NaHCO3脅迫

4、下星星草的基因的表達(dá)處在不斷變化中。 用cDNA微陣列技術(shù)研究NaHCO3脅迫下6h、12h、24h和48h基因的表達(dá)，共篩選到142個(gè)差異表達(dá)明顯的基因。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，各消減文庫(kù)在其所對(duì)應(yīng)的脅迫時(shí)間有97％的基因在上調(diào)表達(dá)，消減文庫(kù)構(gòu)建成功，也表明對(duì)文庫(kù)進(jìn)行EST分析完全可以說(shuō)明哪些基因在脅迫中上調(diào)表達(dá)。芯片分析顯示NaHCO3脅迫下差異基因表達(dá)共有6種模式，其中模式為在6h和24h表達(dá)量高于12h，在48h表達(dá)水平又低于24h的