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1、[目的]本課題旨在探討:移植人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(btuman umbilical cord derived-mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)是否能夠有效修復(fù)大鼠脊髓損傷；經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔途徑移植hUC-MSCs能否到達(dá)脊髓損傷局部,并對(duì)大鼠脊髓損傷產(chǎn)生修復(fù)作用；比較蛛網(wǎng)膜下腔和損傷局部兩種途徑移植hUC-MSCs修復(fù)脊髓損傷的療效；初步探討hUC-MSCs修復(fù)大鼠脊髓損傷的機(jī)制。
[方法]雌性w
2、istar大鼠70只,利用MASCIS ImpactorModel-Ⅱ型打擊器垂直打擊(10g,25 mm),建立大鼠脊髓損傷模型后隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組(A組,10只)、DMEM蛛網(wǎng)膜下腔移植組(B組,10只)、DMEM局部移植組(C組,10只)、細(xì)胞蛛網(wǎng)膜下腔移植組(D組,20只)、細(xì)胞局部移植組(E組,20只)。損傷后1周,A組單純進(jìn)行損傷不做任何移植；B、C組大鼠分別通過蛛網(wǎng)膜下腔和局部途徑移植5μl等量體積DMEM；D、E兩
3、組大鼠分別通過蛛網(wǎng)膜下腔和局部途徑移植等量體積體外分離培養(yǎng)的第5代hUC-MSCs(1×106個(gè))。術(shù)后對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠通過BBB評(píng)分、腳印分析、體感誘發(fā)電位(Somatosensory evokedpotential,SEP)與運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位(Motor evoked potentials,MEP)觀察后肢功能恢復(fù)情況。免疫組化學(xué)染色觀察hUC-MSCs于損傷局部存活、遷移、分化情況；通過膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary a
4、cidic protein,GFAP)免疫組織化學(xué)染色比較各組損傷局部膠質(zhì)瘢痕形成面積；生物素標(biāo)記的葡聚糖胺(Biotinylateddextran amine,BDA)示蹤皮質(zhì)脊髓束(Corticospinal tract,CST),觀察神經(jīng)纖維再生及通過膠質(zhì)瘢痕情況。
[結(jié)果]BBB評(píng)分:E組大鼠于損傷后4周評(píng)分達(dá)9.31±0.37分,明顯高于其他各組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),而其余4組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(
5、p>0.05)。D組BBB評(píng)分于損傷后5周達(dá)9.194±0.26分,高于A組(8.194±0.46)、B組(8.314±0.37)、C組(8.25±0.38)三組,但低于E組(9.87±0.23)分,D組與其它組間比較組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。腳印分析:術(shù)后第6周后肢旋轉(zhuǎn)角度E組(19.03±1.19°)小于D組(21.06±2.08°),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)；術(shù)后第7周兩組后肢協(xié)調(diào)性(D組:2.64±0.27c
6、m,E組:2.33±0.28cm)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。損傷后12周,D組和E組誘發(fā)電位SEP、MEP的P40潛伏期和波幅值與其他組間比較潛伏期短、波幅值高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p<0.05)。免疫組織化學(xué)染色顯示hUC-MSCs移植入大鼠體內(nèi)后可在損傷局部存活并向損傷局部遷移；并向神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞分化；損傷后3周,D組大鼠損傷局部即可見hUC-MSCs,并且損傷后12周局部仍可見移植細(xì)胞。損傷后12周比較損傷局
7、部膠質(zhì)瘢痕面積:D組(140261.93±9137.56)、E組(94180.74±13078.66)均小于A(203127.88±16448.84)、B(219622.47±18944.89)、C(197995.0335±11628.49)三組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),同時(shí)E組較D組更小(p<0.05),而A、B、C三組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)；損傷后13周BDA神經(jīng)示蹤顯示D、E兩組軸突再生明顯增加,部分皮質(zhì)脊髓束再
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