Zwittermicin A的分離純化及其穩(wěn)定性的初步研究.pdf

1、本研究從蘇云金芽孢桿菌庫(kù)斯塔克亞種D1-23（Bacillus thuringiensis. subsp. kurstaki）發(fā)酵液中分離純化出活性物質(zhì)Zwittermicin A，建立了新的Zwittermicin A（雙效菌素）的分離純化和檢測(cè)方法。研究了ZwittermicinA熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性，建立了Zwittermicin A的衰減模型y=ke<'bx>，并對(duì)雙效菌素的保護(hù)劑和對(duì)Bt原粉的增效作用進(jìn)行了初步研究。

2、蘇云金芽孢桿菌庫(kù)斯塔克亞種D1-23發(fā)酵液經(jīng)微濾除去菌體，經(jīng)超濾除去大分子物質(zhì)，得到含雙效菌素上清液。再通過(guò)離子交換法，用D113樹脂吸附上清液，然后用NH<,4>H<,2>PO<,4>溶液進(jìn)行第一次沖洗，不同pH值CH<,3>COONH<,4>液進(jìn)行第二次沖洗，氨水洗脫后在45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得到含活性物質(zhì)的提取液。最后通過(guò)HPLC-MS純化和制備，得到2.89mg ZwittermicinA純品。紫外檢測(cè)沖洗效果表明：離子交換第一次沖

3、洗液NH<,4>H<,2>PO<,4>的最適濃度為5mmol／L，第二次沖洗液CH<,3>COONH<,4>的最適濃度為30mmol／L，梯度沖洗pH值為8.0～9.5：經(jīng)離子交換法分離純化后總收得率達(dá)93％。 通過(guò)對(duì)雙效菌素的熱穩(wěn)定性和pH值穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)建立了雙效菌素的衰減模型y＝ke<'bx>。該模型可靠性高、應(yīng)用范圍廣，對(duì)20℃～100℃、pH3.0～pH 12.0 下Zwittermicin A的降解都適用。雙效菌素的熱穩(wěn)

4、定性和pH值穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明：雙效菌素對(duì)熱敏感，在20℃～100℃范圍內(nèi)溫度越高半衰期越短；在25℃下，pH值2.0～12.0范圍內(nèi)pH值越低，雙效菌素的穩(wěn)定性越強(qiáng)。 溫度對(duì)含雙效菌素發(fā)酵液噴霧過(guò)程中雙效菌素活性的影響。進(jìn)風(fēng)口溫度160℃和170℃時(shí)，噴霧干燥后抑制圈大小相同，均為10.8mm。高于170℃時(shí)抑制圈變小，雙效菌素?fù)p失變大。由于噴霧干燥溫度高時(shí)噴霧速度快、原粉含水量少，有利于原粉的保存。所以選170℃較為合適。