人羊膜細(xì)胞在創(chuàng)傷性腦損傷中應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】：創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)發(fā)病率高，但傳統(tǒng)治療方法療效有限。人羊膜細(xì)胞(HACs)具有多潛能性、移植后不會(huì)誘導(dǎo)免疫排斥反應(yīng)、有足夠的細(xì)胞來(lái)源，還可表達(dá)神經(jīng)細(xì)胞特異標(biāo)記，分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。本實(shí)驗(yàn)擬將HACs置于創(chuàng)傷性腦組織提取液的條件培養(yǎng)基中探究HACs在體外模擬創(chuàng)傷性腦損傷微環(huán)境下的分化和增殖情況，并用HACs和表達(dá)膠源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(GDNF)的HACs靶點(diǎn)移植于大鼠TBI模型以探究二者分別對(duì)TBI大鼠運(yùn)動(dòng)功能和海馬神經(jīng)元的影響

2、。 【方法】：取無(wú)并發(fā)癥剖宮產(chǎn)羊膜，剝離羊膜1小時(shí)內(nèi)用0.25％胰酶反復(fù)消化三次提取HACs，接種后48h去除未貼壁的HACs。采用Feeney法制作大鼠TBI模型，TBI24h后制備創(chuàng)傷性腦組織提取液。將HACs分別接種于RPMI1640培養(yǎng)基(1640)、RPMI1640培養(yǎng)基與正常腦組織提取液(1640+NB)、RPMI1640培養(yǎng)基與創(chuàng)傷性腦組織提取液(1640+TBI)3組。共培養(yǎng)7天后倒置相差顯微鏡檢測(cè)各組細(xì)胞形態(tài)。

3、共培養(yǎng)前后分別行Nestin和MAP2單抗免疫組化檢測(cè)。將HACs以10000/ml和100000/ml兩種密度分別接種上述3種培養(yǎng)基，培養(yǎng)1天、4天、7天后經(jīng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀行四氮唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)。 【結(jié)論】：HACs與創(chuàng)傷性腦組織提取液共培養(yǎng)后可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞；HACs增殖性不佳；在接種于1640+NB和1640+TBI條件培養(yǎng)中的HACs，低密度接種較高密度接種易存活。HACs移植于TBI腦內(nèi)4周后仍可存活且表達(dá)