矮牽牛重瓣基因的初步定位及相關(guān)基因功能分析.pdf

1、重瓣性狀是觀賞植物最重要的觀賞性狀之一，對此分子機理的研究可很大程度上改善植物的花型，使其更具有觀賞性。現(xiàn)階段的研究集中于花特征基因如何決定花器官形成，也可從分子標記方面著手定位相關(guān)基因。矮牽牛作為模式植物，研究其重瓣性狀則具有更大的意義。
　　結(jié)合前人對矮牽?；òl(fā)育過程的分析，可以推測重瓣形成發(fā)生在花發(fā)育早期階段，新的重瓣基因在花芽分化時期起作用，從而調(diào)控花原基數(shù)量，本研究以此為切入點，以期發(fā)掘與重瓣性狀相關(guān)的基因。以遺傳背景相

2、近的單重瓣矮牽牛為材料，采用圖位克隆的方法克隆矮牽牛重瓣相關(guān)基因。前期已用SRAP的分子標記、ISSR標記篩選后已在其附近找到了一個與重瓣性狀緊密連鎖的標記，比對持續(xù)更新的矮牽?；蚪M測序文庫后，獲得其側(cè)翼延長序列共2184468bp，現(xiàn)獲得結(jié)果如下：
　　1、本研究主要是在在此序列兩端設(shè)計特異引物，利用特異序列標記引物進行多態(tài)性分析，結(jié)合BSA標記在1150株單重瓣分離群體中篩選驗證與重瓣性狀緊密連鎖的標記。通過初篩和后期結(jié)合B

3、SA方法篩選，現(xiàn)已找到8個與重瓣緊密連鎖的標記，結(jié)合前期得到的9個，均只在重瓣中擴增出條帶。用1150株群體對其中部分做重組率分析，均無交換單株，與重瓣性狀共分離。
　　2、結(jié)合上述先后得到的17個標記可將與重瓣相關(guān)基因定位至1400kb-2100kb之間，對此區(qū)段的轉(zhuǎn)錄組結(jié)果進行分析，獲得在單重瓣內(nèi)表達發(fā)生差異的區(qū)段，從此區(qū)段的序列特征分析：擴增此片段，比對單瓣和重瓣矮牽牛中片段的差異，發(fā)現(xiàn)在單瓣中單個堿基發(fā)生了部分突變，其余未

4、有太大差異；而重瓣序列與數(shù)據(jù)庫中的原始序列完全一致。
　　3、由于在單瓣和重瓣中，片段產(chǎn)生了單堿基突變，故對此片段的功能進行分析：針對單瓣中堿基發(fā)生突變的片段用Gateway技術(shù)構(gòu)建RNAi干涉載體，轉(zhuǎn)化單瓣矮牽牛W115和野生煙草，分別獲得四棵轉(zhuǎn)基因矮牽牛和二十一棵煙草，其中煙草還未開花無法觀測表型。矮牽牛未發(fā)現(xiàn)與花發(fā)育相關(guān)的性狀產(chǎn)生。
　　根據(jù)上述結(jié)果得出通過分子標記技術(shù)結(jié)合轉(zhuǎn)錄組初步分析獲得的片段對單瓣矮牽牛在花器官表