人外周血淋巴細胞亞群抗腫瘤效應的研究.pdf

1、目的：對人外周血淋巴細胞各亞群殺傷腫瘤細胞效應進行比較，尋找具有高效殺傷腫瘤細胞能力的細胞亞群，并探索體外優(yōu)勢擴增該群細胞的方法，同時對體外擴增的該細胞亞群的抗腫瘤效應進行分析，從而建立腫瘤細胞治療的新方法。
　　 方法：采集健康志愿者的外周血，標記人淋巴細胞譜系標志CD3、CD56、CD8、CD4等對各樣本淋巴細胞亞群進行分析和分選。根據(jù)自然殺傷細胞(narural killercell，NK)細胞和細胞毒性T淋巴細胞(cyt

2、otoxic lymphocyte，CTL)細胞在腫瘤免疫中的作用，本課題關注的淋巴細胞亞群包括CD3-CD56+CD8+細胞、CD3-CD56+CD8-細胞、CD3+CD56+細胞、CD3+CD56-CD8+細胞以及CD3+CD56-CD8bri細胞。分選的淋巴細胞亞群與8種不同個體、不同組織器官來源的人腫瘤細胞系進行體外共培養(yǎng)實驗。通過各淋巴細胞亞群與各腫瘤細胞系的共培養(yǎng)實驗體系，尋找到具備高效廣譜抗腫瘤能力的淋巴細胞亞群，并借助流

3、式細胞儀對其進行了表型和細胞因子分泌譜的檢測。利用現(xiàn)有基礎研究成果，通過體外添加白細胞介素2(interleukin-2，IL-2)、同種異體樹突狀細胞等方式，建立體外擴增該細胞亞群的方法學。擴增后細胞經(jīng)體外精細亞群分選后培養(yǎng)實驗，確定其是否來自于體內(nèi)原有細胞亞群。最后通過體內(nèi)和體外抗腫瘤實驗，確證體外擴增的該細胞亞群能否保持原有的抗腫瘤效應。
　　 結(jié)果：對人外周血各淋巴亞群體外殺傷腫瘤細胞效應比較的結(jié)果表明，每個樣本中CD8

4、+CD56+細胞對60％以上腫瘤細胞系的殺傷效率最高。流式細胞儀檢測結(jié)果表明，CD8+CD56+細胞活化后可表達CD25和CD69，不表達CD107a，并分泌IL-2、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和干擾素γ(interferon-γ，IFN-γ)等細胞因子。體外精細亞群分選后培養(yǎng)，表明體外擴增的CD8+CD56+細胞仍然來源于原有CD8+CD56+細胞亞群。該亞群可通過添加IL-2和同種

5、異體樹突狀細胞進行體外活化和擴增，且擴增后該亞群對腫瘤細胞系的殺傷能力能夠繼續(xù)保持。體內(nèi)抗腫瘤實驗表明，擴增后CD8+CD56+細胞能夠有效抑制HepG2腫瘤細胞在裸鼠體內(nèi)的生長。
　　 結(jié)論：人外周血各淋巴亞群中CD8+CD56+細胞殺傷腫瘤效應最強，殺傷腫瘤譜最廣。CD8+CD56+細胞活化后表達T細胞活化相關標志，分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ等細胞因子，但并不表達CD107a，提示其抗腫瘤效應可能通過誘導靶細胞凋亡