鯉皰疹病毒Ⅱ與嗜水氣單胞菌混合感染致病性研究.pdf

1、水生動(dòng)物病毒細(xì)菌共感染、或者病毒感染后繼發(fā)細(xì)菌感染在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中較為常見，往往較單一感染造成更為嚴(yán)重的的經(jīng)濟(jì)損失，但目前尚缺乏混合感染致病機(jī)理的研究，嚴(yán)重制約了有效防控措施的制定。鯉皰疹病毒Ⅱ（Cyprinid herpesvirus2, CyHV-2）近年來對(duì)我國鯽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大威脅，先前的流行病學(xué)調(diào)查顯示與嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)混合感染的現(xiàn)象較多。為此，本實(shí)驗(yàn)擬構(gòu)建異育銀鯽(Carassius a

2、uratus gibelio)的CyHV-2/AH混合感染模型，分析病毒/細(xì)菌混合感染的致病效應(yīng)及其分子機(jī)理，為鰓出血病臨床防控措施的制定提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　一、鯉皰疹病毒Ⅱ與嗜水氣單胞菌人工感染試驗(yàn)
　　在本研究中，我們對(duì)健康異育銀鯽進(jìn)行不同順序組合的兩種病原混合感染，按同時(shí)感染AH和CyHV-2、先感染AH后感染CyHV-2和先感染CyHV-2后感染AH三種情況設(shè)置以下感染組：AH-CyHV-2-0d；

3、AH-CyHV-2-1d， AH-CyHV-2-3d；CyHV-2-AH-3d， CyHV-2-AH-5d， CyHV-2-AH-9d， CyHV-2-AH-14d。同時(shí)設(shè)置AH與 CyHV-2單獨(dú)感染組以及 PBS對(duì)照組。AH與 CyHV-2的感染劑量為0.1LD50，統(tǒng)計(jì)死亡率。結(jié)果顯示：AH與 CyHV-2同時(shí)感染組與 CyHV-2感染后3d感染 AH組死亡率最高，證明 AH與 CyHV-2間存在協(xié)同致死作用；CyHV-2感染后1

4、4d感染AH死亡率低于AH單獨(dú)感染組，說明CyHV-2感染后14d對(duì)AH感染存在拮抗作用；其他共感染組死亡率較單獨(dú)感染組無明顯變化。
　　二、CyHV-2感染對(duì)免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　以0.1LD50的CyHV-2腹腔注射異育銀鯽，對(duì)照組注射等量 PBS，在感染后1d、3d、7d和14d分別采集頭腎及體腎，，再以熒光定量 PCR法測定感染 CyHV-2后鯽體腎中的病毒載量以及病毒感染前后免疫相關(guān)基因（IL-1β、TNFα

5、、IL-6、IL-10、TLR2、IFNγ、TGFβ）的轉(zhuǎn)錄變化，結(jié)果顯示：
　　CyHV-2感染后1d和3d體腎中病毒載量較高，7d時(shí)病毒載量明顯下降，14d時(shí)病毒載量較感染初期顯著降低（P＜0.05）。
　　同對(duì)照組相比，CyHV-2感染后第1d，IL-1β2在頭腎中表達(dá)水平顯著上升（P＜0.05），其他基因表達(dá)水平無顯著變化； CyHV-2感染后第3d，IL-1β1在頭腎中的表達(dá)水平顯著下降（P＜0.05），在體腎中的