干預(yù)NF-kB信號通路對新生大鼠大腦皮層神經(jīng)元死亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 觀察干預(yù)NF-κB通路對神經(jīng)元NF-κB活化的規(guī)律以及神經(jīng)元死亡包括自噬、凋亡和壞死的影響。
　　 [方法]
　　 取24小時(shí)內(nèi)出生的大鼠，取大腦皮層后進(jìn)行原代培養(yǎng)神經(jīng)元，經(jīng)細(xì)胞免疫化學(xué)鑒定為神經(jīng)元后，將培養(yǎng)的神經(jīng)元分為空白組、激活組、抑制組，其中抑制組細(xì)胞先加入激活劑后再加入抑制劑。各組再分別分成五個時(shí)間點(diǎn)組1h、6h、12h、24h、48h。各時(shí)間組再分別作免疫細(xì)胞熒光觀察NF-κB蛋白的表達(dá)

2、，Westernblot觀察自噬蛋白Beclin1的表達(dá)，Annexin V/PI雙染色法檢測細(xì)胞凋亡和壞死。
　　 [結(jié)果]
　　 1.激活組在各個時(shí)間點(diǎn)的NF-κ B蛋白表達(dá)均高于抑制組和空白組，激活組從6h到24h，NF-κ B蛋白表達(dá)逐漸增加，24h達(dá)到高峰，48h稍下降。抑制組各個時(shí)間點(diǎn)的NF-κ B蛋白表達(dá)均小于激活組，各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 2.凋亡在激活組表達(dá)高

3、于抑制組和空白組，分別與空白組和抑制組比較，6h-48h均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；凋亡在抑制組表達(dá)高于空白組，12h-48h時(shí)間點(diǎn)內(nèi)抑制組和空白組兩兩比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.01)。
　　 3.壞死在激活組和抑制組中的表達(dá)隨時(shí)間的增加而增加，激活組在各個時(shí)間點(diǎn)內(nèi)壞死表達(dá)均高于抑制組，尤以24h、48h明顯(p<0.01)。
　　 4.激活組自噬蛋白Beclin1隨時(shí)間增加而增高，24 h時(shí)神經(jīng)元表達(dá)Be

4、clin1蛋白的量最多，48h時(shí)Beclin1蛋白仍有較多表達(dá)；Beclin1蛋白在各時(shí)間點(diǎn)內(nèi)激活組分別與抑制組和空白組比較，均高于抑制組和空白組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 應(yīng)用NF-κ B激活劑佛波醇酯(PMA)干預(yù)神經(jīng)元可以促使NF-κ B蛋白的表達(dá)量升高，并且隨時(shí)間的增加而升高，24h達(dá)到高峰，48h稍下降；NF-κ B通路激活后早期(1h-24h)神經(jīng)元以自噬和凋亡為主，后期(24