不同方式的準(zhǔn)分子激光表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、隨著準(zhǔn)分子激光角膜屈光手術(shù)的發(fā)展,角膜表面切削術(shù)因?yàn)椴淮嬖诮悄ぐ晗嚓P(guān)并發(fā)癥,擴(kuò)大了近視手術(shù)的矯治范圍以及術(shù)后成像質(zhì)量高等優(yōu)勢(shì)而重新受到關(guān)注。然而,角膜上皮下霧狀混濁(Haze)的發(fā)生是制約角膜表面屈光手術(shù)的一個(gè)重要因索。Haze是準(zhǔn)分子激光角膜表面切削術(shù)后一定時(shí)間在角膜切削區(qū)出現(xiàn)的上皮及其下方基質(zhì)的霧狀混濁,是準(zhǔn)分子激光角膜表面切削術(shù)后的主要并發(fā)癥之一。不同的角膜表面切削方式術(shù)后Haze的發(fā)生率也不同。Haze不僅影響視力,還是造成屈光

2、回退的主要原因。Haze的形成是一個(gè)復(fù)雜的角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)過(guò)程,由多種細(xì)胞和因子參與調(diào)控,是多種因素共同作用的結(jié)果。近年來(lái),角膜表面屈光手術(shù)后Haze形成的機(jī)制及防治已成為屈光手術(shù)研究的熱點(diǎn)。本研究通過(guò)建立機(jī)械法準(zhǔn)分子激光上皮瓣下角膜磨鑲術(shù)(Epi-LASIK)、去瓣的Epi-LASIK(off-flap Epi-LASIK)和準(zhǔn)分子激光屈光性角膜切削術(shù)(PRK)動(dòng)物模型,旨在從病理組織學(xué)角度和分子生物學(xué)水平,比較不同方式的準(zhǔn)分子激光角

3、膜表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷的愈合反應(yīng)和Haze產(chǎn)生的差異,來(lái)探討Haze-形成的機(jī)制,為臨床上準(zhǔn)分子激光治療屈光不正的術(shù)式選擇和Haze的防治提供理論依據(jù)。
　　 第一部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術(shù)后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)的對(duì)比研究
　　 目的:通過(guò)比較兔Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三種角膜表面切削術(shù),探討不同的手術(shù)方式及術(shù)后不同的角膜上皮愈合方式對(duì)早期

4、角膜刨傷愈合反應(yīng)的影響。
　　 方法:健康新西蘭白兔共50只(100只眼),將其中48只(96只眼)隨機(jī)分為Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三個(gè)手術(shù)組,每組32只眼,另2只兔(4只眼)未手術(shù)眼作為正常對(duì)照組。3％成巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5％愛(ài)爾卡因表面麻醉后,實(shí)驗(yàn)眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù),且每只兔的兩

5、只眼分別隨機(jī)行不同的手術(shù)方式。Epi-LASIK術(shù)應(yīng)用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,準(zhǔn)分子激光切削后再將上皮瓣復(fù)位,覆蓋在切削區(qū)上;off-flap Epi-LASIK術(shù)是用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,完成激光切削后,再將上皮瓣去除:PRK術(shù)用角膜上皮刮刀鈍性機(jī)械去除角膜上皮,去除角膜上皮的直徑為9.0mm,將上皮刮除干凈后行激光切削。采用美國(guó)博士倫公司Technolas217型準(zhǔn)分子激光治療儀在實(shí)驗(yàn)眼均行-10.0D激光切削,切削深

6、度120m。分別在術(shù)后4小時(shí)、1天、3天和7天共四個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動(dòng)物,取角膜進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)觀察:1.采用光鏡、透射電子顯微鏡觀察三種手術(shù)后角膜上皮的愈合方式。2.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)角膜基質(zhì)炎癥細(xì)胞數(shù)量、角膜基質(zhì)細(xì)胞凋亡數(shù)量以及自細(xì)胞介素-1(IL-1β)和增殖蛋白Ki-67在角膜基質(zhì)的表達(dá)。
　　 結(jié)論:Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種危膜表面切削術(shù)由于術(shù)中不同的上皮處理方式及術(shù)后不同的上皮

7、愈合方式引起術(shù)后早期角膜創(chuàng)傷愈合反應(yīng)程度的差異。其中off-flap Epi-LASIK的反應(yīng)程度最輕,提示off-flap Epi-LASIK可能在減輕角膜表面切削術(shù)的術(shù)后早期刺激癥狀和遠(yuǎn)期Haze發(fā)生率方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。
　　 第二部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和PRK術(shù)后Haze形成的對(duì)比研究
　　 目的:探討Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三種角膜表面

8、切削術(shù)后在Haze發(fā)生發(fā)展方面存在的差異及成因。
　　 方法:健康新西蘭白兔共47只(94只眼),將其中45只(90只眼)隨機(jī)分為Epi-LASIK,off-flap Epi-LASIK and PRK三個(gè)手術(shù)組,每組30只眼,另2只兔(4只眼)未手術(shù)眼作為正常對(duì)照組。3％戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5％愛(ài)爾卡因表面麻醉后,實(shí)驗(yàn)眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表

9、面切削術(shù),且每只兔的兩只眼分別隨機(jī)行不同的手術(shù)方式。Epi-LASIK術(shù)應(yīng)用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,準(zhǔn)分子激光切削后再將上皮瓣復(fù)位,覆蓋在切削區(qū)上;off-flap Epi-LASIK術(shù)是用微型角膜上皮刀制作角膜上皮瓣,完成激光切削后,再將上皮瓣去除;PRK術(shù)用角膜上皮刮刀鈍性機(jī)械去除角膜上皮,去除角膜上皮的直徑為9.0mm,將上皮刮除干凈后行激光切削。采用美國(guó)博士倫公司Technolas217型準(zhǔn)分子激光治療儀在實(shí)驗(yàn)眼均行-10

10、.0D激光切削,切削深度120μm。三種角膜表面切削術(shù)后,進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)觀察:1、定期在裂隙燈顯微鏡下觀察角膜上皮的愈合情況并記錄每個(gè)手術(shù)組兔角膜上皮的愈合時(shí)間及進(jìn)行Haze的分級(jí)評(píng)估。2、分別于術(shù)后1周、1個(gè)月和3個(gè)月共三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動(dòng)物,取角膜。通過(guò)透射電鏡對(duì)兔術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)角膜的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察;采用免疫組織化學(xué)、免疫印跡法(Western Blot法)等檢測(cè)方法測(cè)定與Haze形成密切相關(guān)的指標(biāo)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和

11、Ⅲ型膠原在角膜中的表達(dá)。
　　 結(jié)論:Epi-LASIK手術(shù)中上皮瓣的保留對(duì)促進(jìn)術(shù)后角膜上皮的愈合、減少Haze形成沒(méi)有明顯的意義,角膜表面切削術(shù)中盡量減少對(duì)角膜上皮的損傷,是防治術(shù)后Haze形成的關(guān)鍵因素。Off-flap Epi-LASIK與Epi-LASIK和PRK比較,術(shù)后角膜上皮愈合快、Haze反應(yīng)輕,有望成為臨床上優(yōu)先選擇的角膜表面屈光手術(shù)方式。
　　 第三部分兔Epi-LASIK、去瓣的Epi-LASIK和

12、PRK術(shù)后
　　 角膜中TGF-β1和CTGF的表達(dá)及其對(duì)Haze形成的影響
　　 目的:通過(guò)觀察Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù)后角膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的表達(dá)情況,探討兩者之間的關(guān)系及其對(duì)術(shù)后Haze發(fā)生發(fā)展的影響。
　　 方法:健康新西蘭白兔共47只(94只眼),將其中45只(90只眼)隨機(jī)分為Epi-LASIK

13、,off-flap Epi-LASIK and PRK三個(gè)手:術(shù)組,每組30只眼,另2只兔(4只眼)未手術(shù)眼作為正常對(duì)照組。3％戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉(1ml/kg體重)和0.5％愛(ài)爾卡因表面麻醉后,實(shí)驗(yàn)眼分別行Epi-LASIK、off-flap Epi-LASIK和PRK三種角膜表面切削術(shù),且每只兔的兩只眼分別隨機(jī)行不同的手術(shù)方式。采用美國(guó)博士倫公司Technolas217型準(zhǔn)分子激光治療儀在實(shí)驗(yàn)眼均行-10.0D激光切削,切削深度

14、120μm。分別于術(shù)后1周、1個(gè)月和3個(gè)月共三個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死各組動(dòng)物取角膜,采用免疫組織化學(xué)和免疫印跡法(Western Blot法)檢測(cè)Haze形成過(guò)程中的兩個(gè)主要調(diào)控因子TGF-β1和CTGF在三種手術(shù)后角膜中的表達(dá)情況。
　　 結(jié)論:TGF-β1和CTGF介導(dǎo)了角膜表面切削術(shù)后角膜創(chuàng)傷的愈合反應(yīng),在愈合反應(yīng)過(guò)程中具有協(xié)同作用,與Haze的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。Off-flap Epi-LASIK術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)角膜中TGF-β1和C