人肺腺癌A-549細(xì)胞膜鉀離子通道特性與細(xì)胞增殖關(guān)系的研究.pdf

1、目的：探討腫瘤細(xì)胞離子通道表達(dá)異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展和增殖的關(guān)系是當(dāng)前腫瘤基礎(chǔ)研究的新熱點(diǎn)。本研究通過(guò)觀察人肺腺癌A-549細(xì)胞膜電壓門控性K+電流的特性及鉀通道阻斷劑四乙胺（TEA）對(duì)A-549細(xì)胞K+電流和細(xì)胞增殖的影響，探討應(yīng)用鉀通道阻斷劑抑制肺腺癌細(xì)胞增殖的可行性，為該領(lǐng)域的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)。方法：以人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)-549細(xì)胞為研究對(duì)象，培養(yǎng)24-72小時(shí)后，選擇單個(gè)貼壁良好、立體感強(qiáng)的細(xì)胞備用。①細(xì)胞電生理實(shí)驗(yàn)：用全細(xì)胞膜片

2、鉗技術(shù)記錄細(xì)胞膜離子通道特性。將微推進(jìn)器推進(jìn)微管電極尖端貼至細(xì)胞膜，負(fù)壓抽吸形成高阻封接，并吸破細(xì)胞膜形成全細(xì)胞膜片；采用去極化階躍方案引出A-549細(xì)胞的電壓依賴性外向K+電流，然后將10mmol/L的TEA加至細(xì)胞浴液中，記錄TEA對(duì)K+電流的影響。②細(xì)胞體外增殖實(shí)驗(yàn)：用四甲基偶氮唑鹽比色試驗(yàn)（MTT法）檢測(cè)0.2、2、20、40和60mmol/L 的TEA分別作用細(xì)胞24、48和72小時(shí)的酶聯(lián)檢測(cè)吸光度值（A），比較不同TEA組對(duì)

3、細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果：①全細(xì)胞膜片鉗記錄模式下，A-549細(xì)胞在測(cè)試電壓范圍-30至+110mV,保持電壓為-70mV時(shí),記錄到一種跨膜外向性電流,該跨膜電流具有電壓依賴性，并且500ms內(nèi)不失活；將10mmol/L的TEA加入細(xì)胞浴液，可明顯抑制該跨膜離子電流，在測(cè)試電壓為+110mV時(shí)，抑制程度為電流從1057.52±59.17pA降低至212.26±11.96pA,電流抑制率為79.92％（p<0.01）。②MTT法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，

4、各TEA劑量組作用細(xì)胞24小時(shí)后A值比較顯示：A值隨著TEA濃度的增加而降低，實(shí)驗(yàn)組20、40和60mmol/L 的TEA與空白對(duì)照組以及組間兩兩比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）,而0.2和2mmol/L 的TEA與空白對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ,表明20、40和60mmol/L 的TEA 能明顯抑制肺腺癌A-549細(xì)胞的體外增殖，抑制率分別為 43％、61％和 78％。結(jié)論：人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)-549細(xì)胞中存在外向性電壓門控性