胃泌素在體外對胃癌細(xì)胞血管生成的作用.pdf

1、【目的】通過體外三維培養(yǎng)研究胃泌素對胃癌細(xì)胞 SGC-7901、AGS血管生成擬態(tài)和人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC血管生成的作用，探討胃泌素在胃癌轉(zhuǎn)移分子機(jī)制中的作用。
　　【方法】三維培養(yǎng) SGC-7901、AGS和HUVEC細(xì)胞，分別加入終濃度為10nmol/L、100nmol/L的胃泌素培養(yǎng)72h后隨機(jī)取5個視野計(jì)數(shù)不同濃度胃泌素處理的胃癌細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞的管狀結(jié)構(gòu)數(shù)；同時進(jìn)行 PAS、HE染色觀察胃泌素對胃癌細(xì)胞血管

2、生成擬態(tài)的影響；利用 RT-PCR、WesternBlot和免疫化學(xué)的方法檢測人體多種組織和細(xì)胞中人胃泌素受體（CCK-BR）和HUVEC細(xì)胞血管標(biāo)記（CD31）的表達(dá)情況；通過 Real-timePCR、ELISA的方法檢測不同濃度胃泌素對胃癌細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞血管生成相關(guān)細(xì)胞因子VEGF、HIF-1α基因和蛋白水平的影響；用 MTT比色法和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)，觀察不同濃度胃泌素對胃癌細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞體外增殖能力和克隆形成率的影

3、響。
　　【結(jié)果】胃癌細(xì)胞 SGC-7901、AGS在三維培養(yǎng)條件下能夠形成血管生成擬態(tài)，HUVEC細(xì)胞能夠形成血管結(jié)構(gòu)；10nmol/L和100nmol/L的胃泌素處理胃癌細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞后血管生成擬態(tài)數(shù)和HUVEC細(xì)胞的管狀結(jié)構(gòu)數(shù)明顯高于對照組（0nmol/L胃泌素處理組），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；RT-PCR、WesternBlot和免疫化學(xué)結(jié)果顯示，胃癌細(xì)胞SGC-7901、AGS和HUVEC細(xì)胞CCK-BR

4、表達(dá)陽性；且 HUVEC細(xì)胞 CD31表達(dá)也是陽性；此外，在肝癌、肺癌等腫瘤細(xì)胞和胃癌、宮頸癌等6種臨床組織標(biāo)本中 CCK-BR也有表達(dá)；胃癌細(xì)胞SGC-7901、AGS和HUVEC細(xì)胞經(jīng)不同濃度胃泌素處理后 HIF-1α基因表達(dá)水平均高于對照組，HUVEC細(xì)胞中 VEGF基因表達(dá)水平在10nmol/L和100nmol/L胃泌素組中均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； SGC-7901、AGS和HUVEC細(xì)胞經(jīng)10nmol/

5、L和100nmol/L胃泌素處理后分泌性 VEGF蛋白水平、細(xì)胞增殖率和細(xì)胞克隆形成率均高于對照組，同時隨胃泌素濃度的增加而增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　【結(jié)論】（1）除胃癌細(xì)胞、組織和HUVEC細(xì)胞外，人體內(nèi)多種組織細(xì)胞也表達(dá)胃泌素受體 CCK-BR，同時，胃泌素和CCK-BR結(jié)合后可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞和HUVEC細(xì)胞體外增殖能力；（2）胃泌素可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞體外血管生成擬態(tài)和人 HUVEC細(xì)胞血管生成的能力；（3）