MHC相合造血干細(xì)胞移植后cGVHD小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT)是治療惡性血液病、某些自身免疫性疾病及實(shí)體瘤等的重要手段，特別是近年來隨著非清髓性干細(xì)胞移植的開展，給更多患者帶來了希望。但是移植物抗宿主病(Graft-versus-host disease，GVHD)仍是移植后的主要并發(fā)癥，是引起移植失敗及患者死亡的主要原因之一。慢性移植物抗宿主病(Chro

2、nic graft-versus-hostdisease，cGVHD)的臨床表現(xiàn)錯(cuò)綜復(fù)雜，在疾病的預(yù)防和治療方面尚無系統(tǒng)、有效的策略。究其原因是我們對(duì)cGVHD的發(fā)病機(jī)理還不是十分清楚。為了能更加深入理解cGVHD的發(fā)病機(jī)制，尋求疾病的預(yù)防和治療新方法，首先要根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究目的，進(jìn)行選擇和建立適合的cGVHD小鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 [目的]：
　　 臨床移植中主要組織相容性復(fù)合物(maJor histocompatib

3、ility antigen，MHC)不匹配移植方式確實(shí)增加了發(fā)生cGVHD的可能。然而在人類白細(xì)胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)匹配的兄妹間移植仍有近40％的患者發(fā)生cGVHD。因此，為了尋求一種更接近臨床慢性移植物抗宿主病綜合癥的動(dòng)物模型，我們選擇MHC匹配，次要組織相容性抗原(Minor histocompatibility antigens，miHAs)不匹配的小鼠建立cGVHD動(dòng)物模型，并在模型建立的

4、基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究疾病的發(fā)病機(jī)理和防治新措施。
　　 [方法]：
　　 以近交系8～12周的雄性DBA/2H-2d為供鼠，近交系8～12周雌性BALB/cH-2d小鼠為受鼠，移植前受鼠接受60Co5.5Gy全身照射的預(yù)處理，隨后采用隨機(jī)數(shù)字表法分成3組，移植組(B、C組)分別經(jīng)尾靜脈輸注5×107個(gè)脾細(xì)胞/只、10×107個(gè)脾細(xì)胞/只，對(duì)照組(A組)輸注0.5mlRPMI1640培養(yǎng)液。觀察指標(biāo)：①每周采血一次，觀察造血重

5、建情況；②實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)行染色體核型分析觀察植入情況；③觀察小鼠的臨床表現(xiàn)并于移植后14天開始每3天進(jìn)行一次評(píng)分；④實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)觀察小鼠的病理變化并評(píng)分，根據(jù)病理結(jié)果，判斷小鼠的成模率。⑤實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)ELISA法檢測(cè)血清抗ds-DNA、B淋巴細(xì)胞活化因子(Bcell-activating factor belonging to the tumor necrosis factor family，BAFF)的含量。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用

6、SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Mean士SD或中位數(shù)表示，不同時(shí)間點(diǎn)外周血白細(xì)胞變化采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析，臨床評(píng)分和病理學(xué)評(píng)分采用非參數(shù)檢驗(yàn)，患病率用Kaplan-Meier法生存曲線表示，并用log-rank檢驗(yàn)，定量資料多組比較采用F檢驗(yàn)。以a=0.05作為顯著性差異的檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 [結(jié)果]：
　　 ①造血重建檢查：各組小鼠在移植4周后白細(xì)胞數(shù)量逐漸恢復(fù)正常，移植組恢復(fù)相對(duì)緩慢；②植入情況檢測(cè)

7、：對(duì)B、C組小鼠進(jìn)行外周單個(gè)核細(xì)胞的染色體檢查，均為混合嵌合體；③cGVHD臨床評(píng)分：A組均未出現(xiàn)cGVHD的臨床表現(xiàn)，B、C組小鼠出現(xiàn)cGVHD臨床表現(xiàn)，兩組的臨床評(píng)分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。④病理學(xué)改變?cè)u(píng)分：A組病理學(xué)檢查未出現(xiàn)cGVHD表現(xiàn)；B、C兩組出現(xiàn)cGVHD的病理學(xué)改變，但是兩組評(píng)分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；根據(jù)病理學(xué)評(píng)分判斷各組小鼠的患病率分別為0％、60％、80％，患病率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。⑤ELI

8、SA檢測(cè)BAFF和抗dsDNA：患病組小鼠的血清BAFF和抗dsDNA含量與對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而且患病組小鼠血清BAFF和抗dsDNA之間有關(guān)聯(lián)性。
　　 [結(jié)論]：
　　 1.MHC相合的DBA-2(H-2d)、BALB/C(H-2d)小鼠分別為供、受鼠，受鼠經(jīng)60Co5.5Gy全身照射預(yù)處理后，輸注供鼠脾細(xì)胞5×107個(gè)/只和10×107個(gè)/只，均可以誘導(dǎo)出cGVHD小鼠模型，但是5×107個(gè)脾