一個(gè)常染色體顯性遺傳先天性白內(nèi)障家系的致病基因的定位研究.pdf

1、目的：
　　 先天性白內(nèi)障是兒童常見(jiàn)的致盲性眼病,流行病學(xué)調(diào)查顯示其患病率為(0.6～6)/10000,新生兒發(fā)病率為(2.2～2.49)/10000[1],先天性白內(nèi)障約有1/3是遺傳的,其遺傳方式有常染色體顯性遺傳(autosomal dominant congenital cataract,ADCC),常染色體隱性遺傳和X連鎖遺傳3種,其中常染色體顯性先天性白內(nèi)障最為常見(jiàn)。先天性白內(nèi)障患者給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。隨著遺

2、傳學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展,迄今為止,發(fā)現(xiàn)至少有22個(gè)基因與ADCC的發(fā)生有關(guān),包括10個(gè)晶狀體蛋白基因(CRYAA、CRYAB,CRYBB1,CRYBB2,CRYBB3、CRYBA4、CRYBA1/A3,CRYGC,CRYGD,CRYGS),4個(gè)膜蛋白基因即縫隙連接蛋白基因(GJA3、GJAB),主要內(nèi)源性膜蛋白基因(MIP26)和晶狀體內(nèi)在膜蛋白基因(LIMI/MP19),4個(gè)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(MAF,PITX3,HSF4,PAX6),細(xì)胞

3、骨架蛋白基因之一(BFSP2),上皮細(xì)胞激酶基因(EPHA2),染色質(zhì)修飾蛋白基因(CHMP4B)以及鐵蛋白輕鏈基因(FTL)。充分利用遺傳資源的優(yōu)勢(shì),發(fā)現(xiàn)新的白內(nèi)障致病基因并揭示其突變規(guī)律和特點(diǎn),并用于產(chǎn)前基因篩查、基因診斷和遺傳咨詢(xún),將有效地預(yù)防先天性白內(nèi)障患兒的出生,提高人口質(zhì)量。本研究收集了生活在我國(guó)東北遼中地區(qū)的遺傳先天性白內(nèi)障大家系,就其相關(guān)致病基因進(jìn)行了一系列的分子遺傳學(xué)研究。
　　 方法
　　 家系材料收

4、集,排除眼部和全身其他遺傳性疾病,對(duì)所有家系成員眼前節(jié)散瞳檢查,并對(duì)先證者做表型認(rèn)定,繪制家系系譜圖。經(jīng)知情同意后,采集先證者及家系成員外周血4ml,-70℃冷凍保存?zhèn)溆?。用Universal Genomic DNA ExtractionKit Ver.3.0提取家系成員白細(xì)胞基因組DNA,在染色體上的1p36、1q21-q25、2q33-q35、3q21-q25、10q25、11p13、11q23-q24、12q12-q14、13q1

5、1-q13、16q22.1、16q23、17q11-q12、21q22.3、22q11-q12區(qū)段內(nèi)選取52個(gè)多態(tài)性微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行連鎖分析。通過(guò)含7 mol/L尿素的8％聚丙烯酰胺變性凝膠電泳分離PCR等位片段,硝酸銀染色顯色,根據(jù)凝膠上DNA片段大小確定微衛(wèi)星標(biāo)記等位基因及家系中各成員的基因型。應(yīng)用LINKAGE軟件(version 5.2)中的MLINK進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記與該家系致病位點(diǎn)的兩點(diǎn)間連鎖分析,計(jì)算LOD值。判斷標(biāo)準(zhǔn):Lod值

6、≥3,兩個(gè)位點(diǎn)肯定連鎖:Lod值≤-2,兩個(gè)位點(diǎn)不連鎖；-2　　 結(jié) 果
　　 該家系成員共計(jì)21人,有8人患病(男性2人,女性6人)；現(xiàn)存家系成員共計(jì)19人,患者都現(xiàn)存。共采集外周血15人份,其中患者血樣8人。先證者Ⅳ1表型為繞核白內(nèi)障,其他家系成員已行白內(nèi)障摘除

7、手術(shù)。先天性白內(nèi)障在家系中連代相傳,男女均有發(fā)病,符合常染色體顯性遺傳特點(diǎn)。根據(jù)微衛(wèi)星標(biāo)記等位基因在8％聚丙烯酰胺尿素變性凝膠中的分布情況,分析家系成員的基因型組成。根據(jù)連鎖分析軟件LINKAGE(version5.2)的要求,建立每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記連鎖分析的家系檔案。通過(guò)對(duì)家系成員進(jìn)行微衛(wèi)星標(biāo)記的連鎖分析,發(fā)現(xiàn)位于染色體1p36、1q21-q25、2q33-q35、3q21-q25、10q25、11p13、11q23-q24、12q12-

8、q14、13q11-q13、16q22.1、16q23、21q22.3、22q11-q12區(qū)段的48個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記與常染色體顯性白內(nèi)障大家系均無(wú)連鎖關(guān)系,LOD值為負(fù)值。但位于17q11-q12的微衛(wèi)D17S469和D17S184,當(dāng)0=0時(shí),最大LOD值為2.71。
　　 結(jié) 論
　　 本研究收集的先天性白內(nèi)障家系,系譜分析表明為常染色體顯性遺傳。在家系的全部患病成員中,排除了與染色體1、2、3、10、11、1213、1