TSLP在動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)中的作用和機(jī)制.pdf

1、第一部分 TSLP在動(dòng)脈粥樣硬化血管內(nèi)的表達(dá)
　　目的:觀察人和動(dòng)脈粥樣硬化(AS)模型小鼠的AS血管內(nèi)是否表達(dá)胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)及其與樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)的關(guān)系。
　　方法:采取人無(wú)AS血管和18周齡的C57BL/6雄性小鼠血管作為正常對(duì)照,人有AS血管和18-22周齡C57BL/6背景ApoE-/-AS模型小鼠病變血管為病變組,用免疫組化法檢測(cè)血管中TSLP、CD11c和CD4的表達(dá),用原位雜交技術(shù)檢測(cè)血

2、管中TSLP mRNA的表達(dá),用雙重免疫熒光法檢測(cè)血管中TSLP和DCs的共表達(dá)關(guān)系。
　　結(jié)果:在人和小鼠正常血管均未見(jiàn)明顯TSLP表達(dá),而在人AS病變血管與AS模型小鼠病變血管內(nèi)均見(jiàn)TSLP及TSLPmRNA表達(dá)。雙重免疫熒光染色顯示TSLP表達(dá)部位周圍明顯DCs聚集。連續(xù)切片免疫組化染色顯示同一血管內(nèi)TSLP表達(dá)部位有DCs和TCs共表達(dá)。
　　討論:TSLP在人及AS模型小鼠的AS血管顯著表達(dá),其周圍可見(jiàn)明顯DCs、

3、TCs聚集,這說(shuō)明TSLP作為DCs的上游激活因子,可能直接參與了AS免疫炎癥反應(yīng)的調(diào)控。
　　第二部分氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TSLP
　　目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)可否誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生TSLP。
　　方法：將ox-LDL(12.5,25,50,100mg/L)與培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)共育12小時(shí),在6小時(shí)和12小時(shí)進(jìn)行檢測(cè),用RT-PCR檢測(cè)TSLP mRNA的表達(dá)

4、,采用免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞胞漿中TSLP表達(dá),用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TSLP的濃度。
　　結(jié)果：在對(duì)照組HUVECs中幾乎未檢測(cè)到TSLP表達(dá);在實(shí)驗(yàn)組,HUVECs中檢測(cè)到TSLP mRNA表達(dá),胞漿內(nèi)顯著表達(dá)TSLP,其上清液中TSLP濃度亦顯著增高,呈劑量-時(shí)間依賴性。
　　結(jié)論：ox-LDL能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TSLP,這可能在血管免疫炎癥反應(yīng)環(huán)節(jié)中起到重要作用。
　　第三部分氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)

5、血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)TSLP
　　目的：探討氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)能否誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生TSLP。
　　方法：將ox-LDL(12.5,25,50,100mg/L)與培養(yǎng)人動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HVSMCs)共育12小時(shí),在6小時(shí)和12小時(shí)進(jìn)行檢測(cè),用RT-PCR檢測(cè)TSLP mRNA的表達(dá),采用免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞胞漿中TSLP表達(dá),用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TSLP的濃度。
　　結(jié)果：正常對(duì)照組HVSMC

6、s中幾乎無(wú)TSLP表達(dá);在實(shí)驗(yàn)組,HVSMCs可檢測(cè)到TSLP mRNA表達(dá),胞漿中顯著表達(dá)TSLP,其上清中TSLP的濃度顯著增高,呈劑量-時(shí)間依賴性。
　　結(jié)論：ox-LDL能夠誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)TSLP,這可能在血管免疫炎癥反應(yīng)環(huán)節(jié)中起重要作用。
　　第四部分阿托伐他汀抑制氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TSLP
　　目的:觀察阿托伐他汀對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)表達(dá)胸腺基質(zhì)淋

7、巴細(xì)胞生成素(TSLP)的影響。
　　方法:原代HUVECs培養(yǎng)72小時(shí)后分為3組,對(duì)照組加50mg/L的ox-LDL培養(yǎng)12小時(shí);實(shí)驗(yàn)組分為2組,分別加50mg/L的ox-LDL和不同濃度的阿托伐他汀培養(yǎng)12小時(shí),于6小時(shí)和12小時(shí)進(jìn)行檢測(cè),用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TSLP的濃度,用RT-PCR檢測(cè)TSLP mRNA的表達(dá),采用免疫熒光法檢測(cè)細(xì)胞胞漿中TSLP表達(dá)。
　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組TSLP和TSLP mRNA的