冠心病患者MBL、CRP以及肺炎衣原體感染的變化及其相關性分析.pdf

1、目的：冠心病是最常見的心血管疾病之一，是一種嚴重危害人類健康的疾病，其病因和發(fā)病機制尚未完全闡明。近年來，感染、炎癥與冠心病的關系成為研究的熱點。本實驗的目的在于檢測冠心病患者與健康對照者MBL基因Exon I54位密碼子點突變情況，同時測定血漿中MBL與CRP含量及肺炎衣原體感染情況，旨在通過分析這些因素的變化及相關性，探討冠心病的可能致病機制，為其輔助診斷和治療提供依據(jù)。 方法： 1 標本的收集與處理取100例冠心病

2、(CHD)病人和60例健康對照人抗凝血，2小時內分離血漿與細胞成分，血漿于-80℃保存，供測定MBL含量、CRP及肺炎衣原體；用鹽酸胍法提取血細胞中DNA，-80℃冰凍保存，供MBL基因突變檢測。 2 測試標本 (1)用PCR-RFLP法測試MBL Exon I 54位密碼子基因點突變：擴增體系為50μl，其中10×Buffer 5μl，dNTP(2.5mmol/L)4μl，primerl(50μmol/L)0.4μl，

3、primer2(50μmol/L)0.4μl，TaqDNA聚合酶(5U/μl)0.5μl，模板4μl，滅菌三蒸水補至50μl。擴增參數(shù)為：預變性95℃5分鐘；95℃45秒、55℃45秒，72℃1分鐘，循環(huán)30次； 末延伸72℃ 5分鐘。擴增產物用TAE配制含0.5μg/ml溴化乙啶2％的瓊脂糖凝膠電泳，加樣5μl/孔，電泳30分鐘；PCR Marker作為參照，對擴增產物進行分析。對擴增產物用限制性內切酶(Bsh N1)酶切：酶

4、切體系為20μl，其中：Bsh N1(10u/μl)0.5 μl，10×Buffer 2μl，DNA擴增產物17.5μl，37℃水浴反應1小時，酶切產物用3％的瓊脂糖凝膠電泳分析。根據(jù)酶切結果，針對性的選擇部分完全切割、不完全切割和未切割的PCR擴增產物測序，進行序列分析比對。 (2)血漿MBL含量測定：按MBL ELISA試劑盒說明書。 (3)用肺炎衣原體IgG ELISA試劑盒測定衣原體感染情況。 (4)免疫比濁法測

5、定Hs-CRP含量，在全自動生化分析儀上進行。 結果： 1 冠心病組、健康對照組MBL基因Exon 154位密碼子點突變頻率100例冠心病人MBL基因ExonI 54位密碼子點突變情況，在所檢測到的100例中，野生型(GGC/GGC)為73例，占73％；突變雜合子型(GGC/GAC)為25例，占25％；突變純合子型(GAC/GAC)為2例，占2％?；蝾l率分別為GGC為85.5％，GAC為14.5％。 60例健康

6、對照組MBL基因ExonI 54位密碼子點突變情況，在所檢測到的60例中，野生型(GGC/GGC)為45例，占75％；突變雜合子型(GGC/GAC)為13例，占27.67％；突變純合子型(GAC/GAC)為2例，占3.32％?；蝾l率分別為GGC為85.8％，GAC為14.2％。經x<'2>檢驗，x<'2>=0.007，p=0.934，冠心病組、健康對照組基因點突變頻率的比較差別無統(tǒng)計學意義。 2 血漿MBL含量測定100例冠心

7、病人血漿MBL含量的平均值為3900μg/L，標準差為3209；60例健康對照組血漿MBL含量的平均值為2056μg/L，標準差為1824。冠心病組血漿MBL含量高于健康對照組，差別有統(tǒng)計學意義(p<0.01)。 3 冠心病組、健康對照組抗肺炎衣原體抗體(CP IgG)的測定100例冠心病人血漿CP IgG陽性51例，占51.00％；60例健康對照組血漿CP IgG陽性20例，占33.33％，二者有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。

8、 4 冠心病組與健康對照組血漿中CRP含量比較分析100例冠心病人血漿CRP含量的平均值為10.257 mg/L，標準差為12.216；60例健康對照組血漿CRP含量的平均值為1.488 mg/L，標準差為1.558，二者比較差別有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.01)。 5 冠心病人CP IgG陽性和陰性組血漿MBL含量的比較按CP IgG陽性和陰性將冠心病人分為兩組，CP IgG陽性組和陰性組的血漿MBL均值(±SD)分別為3

9、819(±3090)μZ/L和3985(±3359)μg/L，經t檢驗二者無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 6 冠心病人CP IgG陽性和陰性組血漿CRP含量的比較按CP IgG陽性和陰性將冠心病人分為兩組，CP IgG陽性組和陰性組的血漿CRP均值(±SD)分別為10.439(± 13.451)mg/L和10.068(±10.921)mg/L，經t檢驗二者無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 7 冠心病組血漿中CRP與MBL含

10、量比較及相關性分析按CRP水平升高(>3mg/L)與否將冠心病人分為兩組，CRP水平升高組和CRP水平正常組的血漿MBL均值(±SD)分別為3723(±2783)μg/L和4258(±3961)μg/L，經t檢驗二者無統(tǒng)計學差異(p>0.05)。 在100例冠心病樣本中，CRP與MBL含量使用Pearson相關性分析，r=0.144，p=0.245，沒有發(fā)現(xiàn)二者有相關關系。 結論： 本研究對中國北方漢族冠心病患者

11、和健康對照的MBL基因54位密碼子點突變，MBL，CPIgG和CRP進行了檢測。發(fā)現(xiàn)以下3點： 1 MBL基因54位密碼子點突變在冠心病組、健康對照組分別為14.5％和14.2％，無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。 2 血漿MBL，CRP均值(±SD)在冠心病組分別為3900(±3209)μg/L和10.26(±12.22)mg/L，在健康對照組分別為2056(±1824)μg/L和1.49(±1.56)mg/L。這兩項指標

12、在冠心病組較健康對照組均顯著升高，差別有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.01)。 MBL與CRP屬于炎癥急性期蛋白，這兩項指標在冠心病組較健康對照組均顯著升高，提示該兩項指標在冠心病診斷和發(fā)生機理中的作用應該進一步研究。雖然MBL和CRP在冠心病人顯著升高，但是這兩項指標之間不顯示相關，提示它們可能以不同機理參與冠心病發(fā)生。 3 冠心病組血漿CP IgG陽性率為51.00％，健康對照組為33.33％，CP IgG在冠心病人中的陽