IL-27對(duì)兒童膿毒癥免疫調(diào)節(jié)作用的初步探討.pdf

1、目的：觀察膿毒癥患兒疾病早期的免疫狀況，了解IL-27的免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制，為IL-27作為膿毒癥治療新方法提供理論依據(jù)。
　　方法：貴州省人民醫(yī)院PICU（兒童重癥監(jiān)護(hù)病房）2014年1月-2014年12月收治的膿毒癥患兒20例，同期我院兒外科擇期手術(shù)患兒20例為對(duì)照組，年齡2歲-13歲，平均年齡為7.5歲。入院后24小時(shí)內(nèi)采集靜脈血。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)、CD4+CD25+Treg+細(xì)胞比例

2、、IL-27+CD4細(xì)胞比例；Ficoll密度梯度離心法+免疫磁珠分離外周血CD4+T細(xì)胞，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real time-PCR)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞Foxp3、CTLA-4、GITR、IL-10、IL-17A、IL-17F、IL-27mRNA變化；ELISA法檢測(cè)血清IL-4、IFN-γ、TGF-β蛋白水平。
　　結(jié)果：
　　1、膿毒癥早期CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)率及細(xì)胞因子的改變：
　?。?）

3、膿毒癥組CD14+單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)率(％)：均＞30%，但顯著低于正常對(duì)照組（P<0.01）。
　?。?）前炎癥細(xì)胞因子變化：ELISA檢測(cè)，膿毒癥組IFN-γ血濃度顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。熒光定量PCR檢測(cè)：膿毒癥組IL-17A、IL-17F mRNA表達(dá)均高于對(duì)照組（P<0.01）。
　?。?）抗炎癥細(xì)胞因子變化：ELISA檢測(cè)，膿毒癥組 TGF-β血濃度低于對(duì)照組（P<0.05），IL-4濃度無顯著差異

4、；熒光定量PCR檢測(cè)：膿毒癥組IL-10mRNA表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P<0.01）。
　　2、CD4+CD25+Treg+細(xì)胞及相關(guān)因子的改變
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血Treg細(xì)胞，膿毒癥組Treg細(xì)胞比例顯著低于對(duì)照組（P<0.01）。
　　（2）熒光定量 PCR檢測(cè) CD4+CD25+Treg+細(xì)胞相關(guān)因子結(jié)果：Foxp3、CTLA-4、IL-10基因表達(dá)方面，膿毒癥組Foxp3、CTLA-4、IL-10mR

5、NA表達(dá)均高于對(duì)照組（P<0.01），GITR差異無顯著性（P＞0.05）。
　　3、IL-27在膿毒癥患兒中高表達(dá)：實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)膿毒癥組患兒CD4+T細(xì)胞高表達(dá)IL-27基因（P<0.01）,同時(shí)經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)膿毒癥組IL-27+CD4+細(xì)胞比例顯著高于對(duì)照組（P<0.01）。
　　4、根據(jù)ELISA法檢測(cè)所得血清IFN-γ、IL-4濃度，得出膿毒癥組IFN-γ/IL-4比值顯著高于對(duì)照組（P<0.01）