河南地區(qū)豬圓環(huán)病毒血清學(xué)調(diào)查及ORF2基因片段的表達(dá).pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus，PCV)屬于圓環(huán)病毒科，是一種無(wú)囊膜的二十面體的單鏈環(huán)狀DNA病毒。該病毒分為兩種基因型，即PCV-1和PCV-2。前者由Tischer等1974年在PK-15(ATCC-CCL31)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，是引起仔豬傳染性先天性震顫的主要病原之一，后者是仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)的重要病原。 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，對(duì)河南省不同地區(qū)、年齡和品種豬的1886份血清樣本進(jìn)

2、行了測(cè)定，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果表明PCV-2在豬群中的感染非常普遍；不同年齡及不同品種豬對(duì)PCV-2的易感性不同；PCV-2的感染可明顯降低豬群對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答；河南省34個(gè)豬場(chǎng)中32個(gè)PCV-2血清抗體呈陽(yáng)性：經(jīng)產(chǎn)母豬陽(yáng)性率57.50％、后備母豬陽(yáng)性率53.84％、斷奶仔豬陽(yáng)性率53.21％、斷奶前仔豬陽(yáng)性率51.33％；土雜豬PCV-2血清抗體陽(yáng)性率52.54％與長(zhǎng)白豬51.31％差別不大，但明顯高于大約克和杜洛克。 根據(jù)Ge

3、nbank發(fā)表的PCV-2核苷酸序列，設(shè)計(jì)并合成兩對(duì)豬Ⅱ型圓環(huán)病毒(PCV-2)ORF2基因特異性引物，從3份患斷奶后仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)的死亡仔豬病料中PCR擴(kuò)增到1株P(guān)CV-2ORF2基因，將其克隆至PMD-19T載體，經(jīng)測(cè)序后，將所測(cè)序列與已公布的PCV-2ORF2序列進(jìn)行同源性比較，并繪制系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)。結(jié)果顯示，所測(cè)毒株與其他毒株的OR

4、F2基因核苷酸同源性為88.2％-100％；進(jìn)化樹(shù)分析表明分離毒株在進(jìn)化上存在地域上的相關(guān)性。將擴(kuò)增出的ORF2基因片段克隆到表達(dá)載體pET-32a,得到陽(yáng)性重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32F2，將重組質(zhì)粒pET-32F2轉(zhuǎn)化到表達(dá)宿主菌BL21(DE3)，經(jīng)1.0mmol/LIPTG誘導(dǎo)，成功表達(dá)了ORF2基因編碼的結(jié)構(gòu)蛋白。表達(dá)的蛋白為融合蛋白，分子量38KD。該蛋白的成功表達(dá)將為進(jìn)一步研究其功能和研發(fā)相應(yīng)的診斷技術(shù)進(jìn)行PCV-2抗體的檢測(cè)