金釵石斛多糖對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的：研究金釵石斛多糖對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可能的機(jī)制，為金釵石斛多糖藥理作用的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1．采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)多糖含量測(cè)定條件和多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。2．水提醇沉法提取金釵石斛多糖；紅外光譜分析該多糖的特征性吸收峰；紫外分光光度法對(duì)多糖純度進(jìn)行判定；苯酚-硫酸法進(jìn)行多糖含量測(cè)定。3．體外培養(yǎng)人白血病K562細(xì)胞，不同濃度金釵石斛多糖（100mg/L，200mg/L，400mg/L，

2、800mg/L）直接作用于K562細(xì)胞24h，48h和72h：①M(fèi)TT比色法觀察細(xì)胞增殖情況：②Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞，利用流式細(xì)胞儀觀察K562細(xì)胞早期凋亡率：利用激光共聚焦顯微鏡觀察K562細(xì)胞凋亡形態(tài)；③real-time PCR檢測(cè)K562細(xì)胞中BCR-ABL融合基因的表達(dá)情況。 結(jié)果：①優(yōu)化了多糖含量測(cè)定條件和多糖提取條件。在最佳條件下，反應(yīng)迅速完全，且生成的有色化合物在90min內(nèi)穩(wěn)定：②提取出的

3、金釵石斛多糖經(jīng)理化性質(zhì)分析，表現(xiàn)出多糖的特征，紅外光譜分析可見(jiàn)多糖的特征性吸收峰，紫外光譜在200nm處有最大吸收峰，苯酚-硫酸法測(cè)得金釵石斛多糖相對(duì)含量為80．2％③MTT和Annexin V-FITC/PI雙染結(jié)果顯示，金釵石斛多糖可抑制K562細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，且隨劑量和時(shí)間的增加效果增強(qiáng)。④real-time PCR結(jié)果顯示金釵石斛多糖可使BCR-ABL融合基因表達(dá)量下降，且隨多糖濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)mRNA表達(dá)量下降明顯