軟骨細(xì)胞微環(huán)境對(duì)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞在體外具有多向分化的能力，相比較其他間充質(zhì)干細(xì)胞的來源，滑膜是最接近關(guān)節(jié)軟骨的組織，具有很高的成軟骨能力有望成為軟骨組織工程中治療軟骨缺損的種子細(xì)胞，本研究的目的利用富含生長(zhǎng)因子的軟骨細(xì)胞上清液誘導(dǎo)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞分化，并對(duì)其鑒定。為構(gòu)建顳下頜關(guān)節(jié)盤進(jìn)一步研究創(chuàng)造條件。
　　方法：（1）無菌條件下獲取大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)的滑膜組織和軟骨。消化法分離軟骨細(xì)胞和滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增。收集軟骨細(xì)胞上

2、清液離心、過濾、凍存?zhèn)溆?。?）培養(yǎng)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞至第3代后離心成微團(tuán)（細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)/ml），使用軟骨上清液為培養(yǎng)基，微團(tuán)培養(yǎng)21天，以正常的滑膜細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。（3）HE染色后觀察形態(tài)，甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)合成情況，（4）采用RT-PCR檢測(cè)RNA水平上Ⅱ型膠原、SOX-9、蛋白多糖基因表達(dá)的影響。（5）采用免疫組織化學(xué)法及免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)軟骨特異性蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：培養(yǎng)3周后，

3、細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)類似的軟骨細(xì)胞樣特征：呈白色、表明光滑，具有一定韌性。HE染色可觀察到細(xì)胞呈似圓形，周圍有基質(zhì)包繞。甲苯胺藍(lán)染色顯示合成了細(xì)胞外基質(zhì)—氨基多糖。Ⅱ型膠原免疫組化學(xué)檢測(cè)后可見胞漿和細(xì)胞外有棕黃色顆粒。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步通過RT-PCR.、免疫印跡技術(shù)檢測(cè)Ⅱ型膠原、蛋白聚糖、SOX-9軟骨特異性基因和蛋白的表達(dá)。證實(shí)軟骨細(xì)胞分泌的可溶性因子可以誘導(dǎo)大鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨方向分化。
　　結(jié)論：滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞與軟骨細(xì)胞混合培養(yǎng)后