雞固有免疫相關(guān)分子熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、固有免疫應(yīng)答(innate immune response)是雞體抵抗病毒感染的第一道防線，雞體通過(guò)免疫細(xì)胞攜帶的模式識(shí)別受體來(lái)識(shí)別病毒感染，激活固有免疫相關(guān)的細(xì)胞信號(hào)通路的傳導(dǎo)，誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子及炎癥因子的產(chǎn)生，最終導(dǎo)致抗病毒物質(zhì)的分泌，從而發(fā)揮雞體的抗病毒作用。固有免疫能夠在宿主接觸有害刺激后的幾分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi)執(zhí)行防御功能，不需要特異性免疫細(xì)胞和抗體參與，在病毒感染初期保護(hù)機(jī)體免受病毒侵害。
　　為建立檢測(cè)雞固有免疫信號(hào)通路相

2、關(guān)分子的熒光定量PCR方法并評(píng)價(jià)其應(yīng)用效果，本研究設(shè)計(jì)和篩選了12個(gè)基因（MDA5、TLR3、TLR7、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6、IFIT5、PKR和OAS）的特異性PCR引物，制備各基因的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，繪制熒光定量 PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)方法的靈敏度、重復(fù)性和特異性進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果表明所建立的檢測(cè)方法敏感度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)線性范圍廣、重復(fù)性好。
　　新城疫病毒（Newcastle dise

3、ase virus，NDV）是危害家禽養(yǎng)殖業(yè)的主要病原之一，能給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為更好地了解NDV的致病機(jī)制，我們分別以不同劑量的基因VII型NDV強(qiáng)毒株和LaSota弱毒株感染SPF雞胚，使用建立的熒光定量PCR方法檢測(cè)和分析感染初期病毒增殖和雞固有免疫信號(hào)通路相關(guān)分子基因轉(zhuǎn)錄水平的動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明，NDV強(qiáng)、弱毒株均可有效地激活雞固有免疫信號(hào)通路，導(dǎo)致包括細(xì)胞模式識(shí)別受體、干擾素、白細(xì)胞介素和抗病毒蛋白等基因轉(zhuǎn)錄水平