山羊早期胚胎性別鑒定及玻璃化冷凍保存的研究.pdf

1、PCR胚胎性別鑒定法經(jīng)過多年的研究，已成為最具應(yīng)用前景的性別鑒定及后代性比控制的技術(shù)。本研究以山羊為試驗動物，針對新鮮胚胎與冷凍胚胎，分別進(jìn)行非電泳PCR及ZFX/ZFY雙擴(kuò)增PCR性別鑒別技術(shù)研究，并對性別鑒定后的胚胎進(jìn)行玻璃化冷凍保存及移植，以形成山羊早期胚胎性別鑒定及鑒定后胚胎玻璃化冷凍保存技術(shù)。
　　 研究表明：
　　 1.根據(jù)山羊SRY基因序列設(shè)計的特異性引物，采用非電泳PCR法對新鮮胚胎進(jìn)行性別鑒定，其鮮胚活

2、體取樣有效率為98.3％(116/118)，性別胚胎(鮮胚)移植產(chǎn)羔率為33.9％(19/56)，非電泳PCR性別鑒定準(zhǔn)確率為94.7％(18/19)。
　　 2.通過將鹿茸提取物和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF—β1)分別以不同濃度添加到含10％FCS的PBS基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，對經(jīng)顯微切割取樣后的山羊早期胚胎進(jìn)行體外修復(fù)試驗。結(jié)果表明，添加鹿茸提取物組(15μg/ml)，囊胚發(fā)育率為71.4％(12/14)，顯著高于對照組(未經(jīng)處理)46.

3、7％(7/15)(P＜0.05)和添加TGF—β組(30ng/ml)50.0％(8/16)(P＜0.05)。
　　 3.根據(jù)牛、羊的ZFX及ZFY基因設(shè)計出ZFX/ZFY雙擴(kuò)增引物，用已知性別的牛、羊的血液基因組DNA模板檢測，并進(jìn)行山羊早期胚胎性別鑒定及性別胚胎的冷凍保存和移植試驗。結(jié)果表明，胚胎PCR性別鑒定準(zhǔn)確率為100％(7/7)。
　　 4.以小鼠早期胚胎為對象，進(jìn)行玻璃化液和玻璃化冷凍方法的篩選優(yōu)化。結(jié)果表明