慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞遺傳學(xué)研究及STI571聯(lián)合化療藥物對K562細(xì)胞作用的研究.pdf

1、慢性粒細(xì)胞白血病是一種起源于多能造血干細(xì)胞的惡性增殖性疾病。慢性粒細(xì)胞白血病的細(xì)胞遺傳學(xué)特征是有Ph染色體，即t(9；22)(q34；q11)。9號染色體上的abl基因易位到22號染色體的bcr上，形成bcr/abl融合基因。bcr/abl融合基因是慢性粒細(xì)胞白血病的分子生物學(xué)標(biāo)志。隨著臨床應(yīng)用范圍的擴(kuò)大和時間推移，其耐藥現(xiàn)象也逐漸顯現(xiàn)。繼續(xù)尋找新的，有效的方案以提高STI571的療效，克服耐藥現(xiàn)象以至根除白血病克隆，是目前研究慢性粒細(xì)

2、胞白血病治療的一個熱點(diǎn)。本研究旨在研究伴復(fù)雜變異染色體易位、17號等臂染色體異常和8號三體染色體異常的慢性粒細(xì)胞白血?。谎芯縎TI571與高三尖杉脂堿或阿糖胞苷聯(lián)合應(yīng)用對K562細(xì)胞凋亡的影響和對bcr/abl融合基因的作用。本研究兩部分： 第一部分：慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞遺傳學(xué)研究；第二部分：STI571聯(lián)合化療藥物對K562細(xì)胞作用的研究。第一部分：慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞遺傳學(xué)研究一.25例伴復(fù)雜變異易位的慢性粒細(xì)胞白病細(xì)胞遺傳

3、學(xué)分析目的報道25例伴復(fù)雜變異易位的慢性粒細(xì)胞白血病染色體檢查結(jié)果并進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)分析。方法25例染色體制備采用骨髓細(xì)胞直接法和/或短期培養(yǎng)法，應(yīng)用R顯帶技術(shù)對其進(jìn)行顯帶分析，bcr/abl融合基因檢測采用RT-PCR法。結(jié)果經(jīng)染色體檢測的1209例的慢粒中25例伴復(fù)雜變異易位。伴復(fù)雜變異易位者占經(jīng)染色體檢測慢粒的2.07％。25例伴復(fù)雜變異易位的慢粒中，慢性期22例，急變期3例。僅累及3條染色體的復(fù)雜變異易位17例；除累及3條染色體的

4、復(fù)雜變異易位外，還伴有其他染色體異常的7例。25例中，24例復(fù)雜變異易位同時累及9和22號染色體。有一例僅累及22號染色體。其中6例曾檢出bcr/abl融合基因，均為陽性，其中4例為b3a2型，2例為b2a2型。本組中除b3a2，b2a2型bcr/abl融合基因外，還有無其他類型有待于更進(jìn)一步的分子生物學(xué)研究。 二、12例伴17號等臂染色體的慢性粒細(xì)胞白血病報告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)目的報道12例伴17號等臂染色體的慢性粒細(xì)胞白血病。方法1

5、2例染色體制備采用骨髓細(xì)胞直接法和/或短期培養(yǎng)法，應(yīng)用R顯帶技術(shù)對其進(jìn)行顯帶分析。結(jié)果經(jīng)染色體檢測的1209例的慢粒中12例伴7號等臂染色體。伴7號等臂染色體的慢粒占經(jīng)染色體檢測慢粒的0.99％。12例伴7號等臂染色體的慢粒中，慢性期6例、加速期4例、急變期2例。分別占所檢出伴i(17q)慢粒的6/12(50％)、4/12(33％)和2/12(16％)。除5例僅有i(17q)，t(9；22)(q34；q11)異常外，其余8例均伴有其他染

6、色體異常，占所檢出伴i(17q)慢粒的8/12(67％)。在這8例中，伴雙ph染色體者2例，占所檢出伴i(17q)慢粒的2/12(67％)，、伴+8者4例，占所檢出伴i(17q)慢粒的4/12(33％)。結(jié)論經(jīng)染色體檢測的1209例的慢粒中12例伴7號等臂染色體。伴7號等臂染色體的慢粒占經(jīng)染色體檢測慢粒的0.99％。i(17q)的功能意義尚不明了，伴有i(17q)的慢粒容易由慢性期發(fā)展為急性期的原因也未明了。有待進(jìn)一步的研究。

7、三、17例伴8號三體染色體異常的慢性粒細(xì)胞白血病報告并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)目的報告17例伴8號三體染色體異常的慢性粒細(xì)胞白血病。方法17例染色體制備采用骨髓細(xì)胞直接法和/或短期培養(yǎng)法，應(yīng)用R顯帶技術(shù)對其進(jìn)行顯帶分析。結(jié)果經(jīng)染色體檢測的1210例的慢粒中17例伴8號三體染色體異常。伴8號三體染色體異常的慢粒占經(jīng)染色體檢測慢粒的1.40％。17例伴8號三體染色體異常的慢粒中，慢性期8例、加速期6例、急變期3例。分別占所檢出伴+8異常慢粒的47％(8/1

8、7)、35％(6/17)和18％(3/17)。除3例僅有+8，t(9；22)(q34；q11)異常外，其余14例均伴有其他染色體異常，占所檢出伴+8慢粒的82.3％(14/17)。在這14例中，伴雙ph染色體者2例，占所檢出伴+8慢粒的11.8％(2/17)，伴i(17q)者3例，占所檢出伴+8慢粒的17.6％(3/17)伴+19者1例，占所檢出伴+8慢粒的5.9％(1/17)。結(jié)論經(jīng)染色體檢測的1210例的慢粒中17例伴8號三體染色體

9、異常。伴8號三體染色體異常的慢粒占經(jīng)染色體檢測慢粒的1.40％。16例伴8號三體染色體異常的慢粒中，慢性期8例、加速期5例、急變期3例。分別占所檢出伴+8異常慢粒的47％(8/17)、35％(6/17)和18％(3/17)。除3例僅有+8，t(9；22)(q34；q11)異常外，其余14例均伴有其他染色體異常，占所檢出伴+8慢粒的82.3％(14/17)。在這14例中，伴雙ph染色體者2例，占所檢出伴+8慢粒的11.8％(2/17)，伴

10、i(17q)者3例，占所檢出伴+8慢粒的17.6％(3/17)伴+19者1例，占所檢出伴+8慢粒的5.9％(1/17)。 第二部分：STI571聯(lián)合化療藥物對K562細(xì)胞作用的研究目的探索STI571與高三尖杉酯堿或阿糖胞苷聯(lián)合應(yīng)用有否協(xié)同抑制K562細(xì)胞增殖、影響K562細(xì)胞凋亡的作用；STI571與阿糖胞苷或高三尖杉堿酯聯(lián)合應(yīng)用是否對K562細(xì)胞的bcr/abl融合基因有協(xié)同作用。方法實(shí)驗(yàn)分為對照組，STI571作用組，高三

11、尖杉酯堿作用組，阿糖胞苷作用組，STI571聯(lián)合高三尖杉酯堿作用組和STI571聯(lián)合阿糖胞苷作用組。采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察和AnnexinV-PI聯(lián)合雙染檢測各組藥物對K562細(xì)胞凋亡的影響；采用實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測各組藥物對K562細(xì)胞作用后bcr/ablmRNA水平的變化。結(jié)果STI571作用組，高山尖杉酯堿作用組，阿糖胞苷作用組，STI571聯(lián)合高山尖杉酯堿作用組和STI571聯(lián)合阿糖胞苷作用組的藥物對K562細(xì)胞作用8小時后的細(xì)胞

12、生長抑制率分別為11.00±5.19％，21.66±2.96％，15.00±4.35％，23.33±2.60％和17.33±6.06％。各藥物作用組作用K562細(xì)胞8小時后都出現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。STI571，高三尖杉酯堿，阿糖胞苷，STI571聯(lián)合高三尖杉酯堿和STI571聯(lián)合阿糖胞苷對K562細(xì)胞作用8小時后早期細(xì)胞凋亡率分別為3.06％，5.44％，2.49％，13.44％和4.49％(對照：0.53％)。STI571，高

13、三尖杉酯堿，阿糖胞苷，STI571聯(lián)合高三尖杉酯堿和STI571聯(lián)合阿糖胞苷對K562細(xì)胞作用8小時后晚期細(xì)胞凋亡率分別為1.15％，2.95％，2.69％，8.49％和2.45％(對照：1.13％)。STI571、高三尖杉酯堿，阿糖胞苷，STI571聯(lián)合高三尖杉酯堿和STI571聯(lián)合阿糖胞苷作用K562細(xì)胞8小時后，K562細(xì)胞的bcr/ablmRNA水平分別為46.96％，45.67％，44.52％，23.73％和36.20％(對照

14、：68.54％) 結(jié)論STI571聯(lián)合高山尖杉酯和STI571聯(lián)合阿糖胞苷聯(lián)合用藥后與單藥相比，細(xì)胞生長抑制率有一定的增加。STI571與高三尖杉酯堿聯(lián)合對于誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡具有較強(qiáng)的協(xié)同作用，STI571與阿糖胞苷聯(lián)合對于誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的協(xié)同作用不明顯。STI571與高三尖杉酯堿或阿糖胞苷聯(lián)合應(yīng)用對K562細(xì)胞的抑制增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用中，主要是誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡而不是抑制K562細(xì)胞增殖。STI571聯(lián)合高三尖杉酯堿對