兔大型艾美耳球蟲感染調(diào)查及其濰坊株分離鑒定與早熟選育研究.pdf

1、兔球蟲病是由孢子蟲綱真球蟲目艾美耳科艾美耳屬的一種或幾種艾美耳球蟲引起的一種以腹瀉為主要癥狀的疾病，病原寄生于家兔肝臟或腸上皮細(xì)胞內(nèi)。其中，大型艾美耳球蟲是導(dǎo)致該病發(fā)生的主要蟲種之一，該球蟲具有傳染性廣和致病力強(qiáng)等特點(diǎn)，嚴(yán)重阻礙了養(yǎng)兔業(yè)的發(fā)展進(jìn)程。
　　當(dāng)前，我國(guó)防控兔球蟲病主要使用抗球蟲藥，長(zhǎng)期及不當(dāng)?shù)乃幬锸褂脤?dǎo)致了耐藥蟲株和藥物殘留等問題的出現(xiàn)，一方面危及人體的健康，另一方面使得藥物防治兔球蟲病的弊端日益突顯起來。國(guó)內(nèi)外對(duì)禽球

2、蟲病免疫預(yù)防方面的研究取得了較大的成果，國(guó)內(nèi)已經(jīng)有了商品化雞球蟲疫苗的生產(chǎn)和使用，但兔球蟲疫苗目前在國(guó)內(nèi)研究的人很少，商品化的兔球蟲疫苗在市場(chǎng)上更沒有出現(xiàn)和使用。
　　本論文第一部分研究?jī)?nèi)容是廣東、廣西和山東部分地區(qū)兔大型艾美耳球蟲流行病學(xué)調(diào)查。分別采集濰坊、佛山、河源、陽春、玉林、桂林、南寧7個(gè)地區(qū)9個(gè)不同規(guī)模、不同品種及不同年齡段的936份新鮮兔糞便樣品，然后對(duì)采集的糞便樣品應(yīng)用飽和鹽水漂浮法檢測(cè)其中有無卵囊的存在，并通過卵囊

3、形態(tài)學(xué)去判斷兔球蟲卵囊的類型。結(jié)果顯示，感染大型艾美耳球蟲的陽性樣品所占比例為33.11％（310/936）；不同地區(qū)中，玉林地區(qū)的感染率最高達(dá)到40.06%，南寧地區(qū)感染率最低為12.00%，其他地區(qū)感染率均超過20%；在不同年齡階段中，幼兔的染率最高為60.00%，青年兔的感染率次之為29.82%，種兔的感染率最低為9.52%；不同養(yǎng)殖規(guī)模中，規(guī)?；笮宛B(yǎng)殖場(chǎng)的兔大型艾美耳球蟲感染率最低為26.59%，中型和小型散養(yǎng)戶的兔大型艾美耳

4、球蟲感染率則較高，分別為27.94%和40.28%；在不同品種中，伊拉兔的感染率最高為40.06%，比利時(shí)兔的感染率最低為12.00%，其他品種兔大型艾美耳球蟲的感染率均超過25%。
　　本論文第二部分研究?jī)?nèi)容是進(jìn)行兔大型艾美耳球蟲濰坊株的單卵囊分離及其基本生物學(xué)特性的研究。應(yīng)用瓊脂薄膜法進(jìn)行兔球蟲單卵囊分離，從含混合球蟲卵囊的新鮮糞便中分離出大型艾美耳球蟲卵囊，純化后接種無球蟲兔進(jìn)行繼代增殖。參照Oliveira發(fā)表設(shè)計(jì)的兔大型

5、艾美耳球蟲18s DNA序列，合成引物后對(duì)所提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，之后進(jìn)行測(cè)序比對(duì)。結(jié)果顯示，所分離純化的球蟲卵囊為大型艾美耳球蟲純種蟲株。對(duì)其部分生物學(xué)特性的研究結(jié)果表明：大型艾美耳球蟲的潛隱期為140～142 h，孢子化時(shí)間最早為32 h，80%的卵囊完成孢子化所需要時(shí)間為45 h；隨機(jī)測(cè)量100個(gè)孢子化卵囊后發(fā)現(xiàn)其平均大小為35.76μm×21.91μm，形態(tài)指數(shù)為1.63。為測(cè)定其繁殖力，以500、1000和3000個(gè)孢子化卵囊

6、經(jīng)口分別接種40日齡無球蟲兔，結(jié)果顯示其繁殖能力隨接種劑量的增大呈減小趨勢(shì)；大型艾美耳球蟲具有較強(qiáng)的致病性，分別以1萬、3萬、5萬個(gè)孢子化卵囊的劑量接種40日齡無球蟲兔，結(jié)果顯示，三組兔子均出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退、腹瀉等現(xiàn)象。剖檢可見空腸和回腸均有病變，接種3萬和5萬劑量組兔腸道漿膜層明顯充血，腸腔明顯擴(kuò)張，且腸壁變薄，剪開腸道可見大量黏液樣物質(zhì)，且有紐扣樣壞死出現(xiàn)，用蓋玻片刮取病變腸壁黏膜，放置于顯微鏡下觀察，可見大量裂殖體。

7、　　本論文第三部分研究?jī)?nèi)容是對(duì)兔大型艾美耳球蟲進(jìn)行早熟選育，之后測(cè)定早熟株的潛隱期、卵囊大小、致病性以及其穩(wěn)定性，同時(shí)設(shè)置親本株試驗(yàn)組進(jìn)行對(duì)照。經(jīng)過連續(xù)27代的早熟選育后，早熟株的潛隱期由親本株的142 h縮短至130 h，卵囊平均大小為34.41μm×21.13μm，形態(tài)指數(shù)為1.63；從臨床癥狀及增重情況進(jìn)行致病性的對(duì)比，早熟株的致病性要小于親本株；排卵高峰期上，早熟株出現(xiàn)在第8天，較親本株的第9天提前一天，且早熟株排卵高峰期峰值低