HIF-1α、VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：從蛋白和分子水平檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥(簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥，EMs)組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1a(hypoxia induciblefactor-1a,HIF-1a)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達(dá)水平及其過度表達(dá)與EMs血管生成機(jī)制之間的關(guān)系。進(jìn)一步了解HIF-1a在EMs發(fā)生、發(fā)展過程中所發(fā)揮的作用，為指導(dǎo)臨床診斷和治療提供理論依據(jù)。 方法：(1)研究對(duì)象：選自

2、2006年6月-2007年10月間我院手術(shù)治療并經(jīng)病理證實(shí)的EMs異位內(nèi)膜組織(ectopic endometrium，簡(jiǎn)稱EC)、在位內(nèi)膜組織(eutopic endometrium，簡(jiǎn)稱EU)和正常的子宮內(nèi)膜組織(normal endometrium，簡(jiǎn)稱NE)標(biāo)本共75例，其中①研究組：異位內(nèi)膜組織、在位內(nèi)膜組織各30例，患者中位數(shù)年齡32.6歲(21～38歲)。②對(duì)照組：正常的子宮內(nèi)膜15例，取自同期因非EMs不孕行腹腔鏡檢查同

3、時(shí)刮宮送病理的患者(刮取的子宮內(nèi)膜均由病理證實(shí)為正常的子宮內(nèi)膜)，患者中位數(shù)年齡32.4歲(26～35歲)。各組患者年齡無差異，所有病例均經(jīng)組織學(xué)證實(shí)，月經(jīng)周期正常，且無內(nèi)分泌、免疫及代謝系統(tǒng)疾病，術(shù)前6個(gè)月無甾體類激素治療史，近來6個(gè)月無內(nèi)異癥治療史及IUD置入史。所取標(biāo)本一部分經(jīng)10％固定，用于免疫組化定性分析，一部分迅速放入液氮中，用于RT-PCR定量分析。所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 (2)實(shí)驗(yàn)方法：采用免疫組

4、化的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)組的在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜和對(duì)照組中的HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)進(jìn)行測(cè)定。采用RT-PCR的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)組的在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜和對(duì)照組中的HIF-1α、VEGFmRNA表達(dá)進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果：(1)HIF-1α、VEGF蛋白的陽性分布HIF-1α陽性表達(dá)主要見于異位內(nèi)膜(Fig.1)、在位內(nèi)膜(Fig.2)腺上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，個(gè)別異位內(nèi)膜間質(zhì)亦可有表達(dá)。正常子宮內(nèi)膜組織(Fig.3)中HIF-1α蛋白無表達(dá)；VEGF陽性

5、表達(dá)主要見于異位內(nèi)膜(Fig.4)、在位內(nèi)膜(Fig.5)、正常內(nèi)膜(Fig.6)的腺上皮細(xì)胞，在間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿也可見。 (2)HIF-1α、VEGF蛋白在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和正常內(nèi)膜組織中的表達(dá)：HIF-1α蛋白在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜的陽性表達(dá)率分別為86.6％、30.0％、0％(Tab.1)；VEGF在在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜、正常內(nèi)膜的陽性表達(dá)率分別為66.6％、90.0％、20.0％(Tab.2)。HIF

6、-1α蛋白在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中的表達(dá)顯著高于正常內(nèi)膜(χ2=34.73，P＜0.05；χ2=7.32，P＜0.05)；HIF-1a蛋白在異位內(nèi)膜的表達(dá)高于在位內(nèi)膜(χ2=19.82，P＜0.05)；HIF-1α蛋白在EMs中在位內(nèi)膜和正常內(nèi)膜的月經(jīng)周期中表達(dá)均無顯著性差異(P＞0.05)；VEGF蛋白在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中的表達(dá)顯著高于正常內(nèi)膜(χ2=6.89，P＜0.05：χx2=24.96，P＜0.05)；VEGF蛋白在位內(nèi)膜的表

7、達(dá)高于異位內(nèi)膜(χ2=4.81，P＜0.05)。VEGF蛋白在EMs中在位內(nèi)膜月經(jīng)周期中表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)。 EMs異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中HIF-1α蛋白與VEGF蛋白的表達(dá)存在相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為(r=0.73，P＜0.05；r=0.68，P＜0.05)(Tab.6，Tab.7)。 (3)HIF-1α、VEGFmRNA在EMs的表達(dá)HIF-1α mRNA擴(kuò)增基因片段：469bp(Fig.7)，VEGFmRNA擴(kuò)增

8、基因片段：245bp(Fig.8)，β-action mRNA擴(kuò)增基因片段：205bp(Fig.9)。EMs異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中HIF-1αmRNA表達(dá)量分別為(0.789±0.326)、(0.295±0.154)，顯著高于正常內(nèi)膜HIF-1αmRNA的表達(dá)量(0.124±0.012)(t=33.51，P＜0.05)；而異位內(nèi)膜HIF-1αmKNA表達(dá)量又顯著高于在位內(nèi)膜(t=26.30，P＜0.05)(Tab.3)。EMs異位內(nèi)膜、在

9、位內(nèi)膜中VEGF mRNA 表達(dá)量分別為 (8.160±5.342)、(11.521±7.420)，顯著高于正常內(nèi)膜VEGFmRNA的表達(dá)量(2.770±1.028)(t=43.98，P＜0.05)；而VEGFmRNA在異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜表達(dá)無顯著性差異(t=3.09，P＞0.05)(Tab.4)；VEGF mRNA和HIF-1α mRNA表達(dá)相對(duì)量的相關(guān)性分析表明：EMs中異位內(nèi)膜組VEGF mRNA和HIF-1α mRNA表達(dá)相對(duì)量

10、有密切相關(guān)性(r=0.83，P＜0.05)，在位內(nèi)膜VEGF mRNA和HIF-1α mRNA表達(dá)相對(duì)量有密切相關(guān)性(r=0.72，P＜0.05)。 結(jié)論：(1)HIF-1α蛋白、mRNA在EMs的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中的表達(dá)水平均顯著高于正常內(nèi)膜，HIF-1α在EMs異位內(nèi)膜的表達(dá)顯著高于EMs的在位內(nèi)膜。 (2)VEGF蛋白、mRNA在EMs的異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜中的表達(dá)水平均顯著高于正常內(nèi)膜，VEGF蛋白在EMs在位內(nèi)

11、膜的表達(dá)顯著高于EMs的異位內(nèi)膜，而VEGF mRNA在EMs在位內(nèi)膜的表達(dá)與異位內(nèi)膜無顯著性差異。 HIF-1α蛋白在正常子宮內(nèi)膜和EMs中都無周期性表達(dá)，VEGF蛋白在正常子宮內(nèi)膜有周期性表達(dá)，而在EMs中在位內(nèi)膜周期性表達(dá)消失。 (3)EMs組織中HIF-1α和VEGF表達(dá)呈正相關(guān)，說明HIF-1α在EMs中可能促進(jìn)了VEGF的表達(dá)。 (4)統(tǒng)計(jì)分析表明HIF-1α、VEGF在EMs中的表達(dá)水平比正常內(nèi)膜增