幽門螺桿菌促HepG2細(xì)胞增殖及其機制研究.pdf

1、目的： 探究幽門螺桿菌(Hp)是否具有促肝細(xì)胞增殖的作用，并揭示促增殖的可能機制，為進一步研究幽門螺桿菌致肝癌的機制奠定基礎(chǔ)。 方法： 1.幽門螺桿菌對HepG2細(xì)胞增殖的影響：將不同量的幽門螺桿菌(國際標(biāo)準(zhǔn)株NCTC11637)作用于HepG2肝細(xì)胞，以同批次的同步化后未加細(xì)菌的HepG2細(xì)胞作為對照組，用CCK-8法，通過酶標(biāo)儀讀取各孔的OD值，檢測細(xì)胞的增殖情況并確定最佳的幽門螺桿菌作用劑量。 2.

2、基因芯片檢測：應(yīng)用Affymetrix人類基因表達(dá)譜芯片，檢測幽門螺桿菌促HepG2細(xì)胞增殖時細(xì)胞基因表達(dá)譜的變化。 3.RT-PCR半定量技術(shù)驗證部分基因芯片結(jié)果：將具有促進HepG2細(xì)胞增殖濃度的幽門螺桿菌與HepG2細(xì)胞共浴24小時，提取HepG2細(xì)胞的RNA，未經(jīng)幽門螺桿菌處理的HepG2細(xì)胞作為對照組，用半定量RT-PCR的方法檢測HepG2細(xì)胞部分基因表達(dá)情況(依據(jù)基因芯片結(jié)果挑選出五對基因)，以驗證基因芯片的結(jié)果。

3、 結(jié)果： 1、幽門螺桿菌在一定的MOI比值下(0.30:1～0.075:1)，HepG2細(xì)胞增殖活性明顯增強。 2、基因芯片的結(jié)果顯示，HepG2細(xì)胞經(jīng)Hp作用后(MOI比值：0.15:1)時有19個表達(dá)上調(diào)基因，下調(diào)基因16個，其中與細(xì)胞骨架/基質(zhì)有關(guān)的上調(diào)基因6個，包括intercellular adhesion molecule 1(ICAM-1)、transgelin、talin 1、tubulin、In

4、tegrin及keratin 23。DNA結(jié)合蛋白基因8個，上調(diào)4個為tubulin beta polypeptide paralog、Cell division cycle 2-like 5、myelin expression factor 2、V-erb-a erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 4；下調(diào)基因有4個分別為zinc finger protein 513、nucle

5、ar reccptor subfamily 1(group I，member 3)、Clock homolog、SRY(sex determining region Y)-box 5。細(xì)胞因子相關(guān)基因下調(diào)2個為interleukin 8及interleukin 1 family，member 9。 3、半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示，以未加幽門螺桿菌處理的HepG2細(xì)胞作為對照組，加入幽門螺桿菌處理的HepG2細(xì)胞基因的Tubu

6、lin、ICAM、ARTS、Akeratin、ARHGDIA等轉(zhuǎn)錄水平顯著增高，經(jīng)兩樣本T檢驗具有顯著性差別(P<0.05)，該結(jié)果與之前的基因芯片的結(jié)果相符合。 結(jié)論： 1、幽門螺桿菌在適當(dāng)?shù)腗OI比值下(0.30～0.075:1)下，對HepG2細(xì)胞具有明顯的促增殖作用。 2、基因芯片結(jié)果顯示幽門螺桿菌在促進HepG2細(xì)胞增殖的過程中，HepG2細(xì)胞基因表達(dá)有明顯改變，這些異常改變的基因可能參與了幽門螺桿菌致

7、肝癌的過程。其中與細(xì)胞骨架/基質(zhì)有關(guān)的上調(diào)基因有6個。DNA結(jié)合蛋白基因上調(diào)8個，其中上調(diào)基因4個、下調(diào)基因有4個。細(xì)胞因子相關(guān)基因下調(diào)2個這些異常改變的基因可能參與了幽門螺桿菌致肝癌的過程。 3、半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示，幽門螺桿菌處理組比對照組的HepG2細(xì)胞某些基因轉(zhuǎn)錄水平顯著增高。這些基因可能參與了幽門螺桿菌對細(xì)胞的促增殖過程甚至在肝癌的發(fā)生中發(fā)揮作用，通過這些基因的研究可能有助于進一步明確幽門螺桿菌與人類肝臟疾病