微生物來(lái)源的神經(jīng)保護(hù)化合物的篩選及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、帕金森癥、阿爾茨海默病、亨廷頓氏舞蹈病等神經(jīng)退行性疾病是一種以原發(fā)性神經(jīng)元變性為基礎(chǔ)的進(jìn)行性慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，對(duì)中老年人的健康有嚴(yán)重的威脅。目前，臨床上應(yīng)用的抗神經(jīng)退行性疾病藥物大多是以改善臨床癥狀為主，無(wú)法控制其病程進(jìn)展，遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足治療的需求。因此，創(chuàng)制抗神經(jīng)退行性疾病新藥對(duì)預(yù)防和治療這類(lèi)疾病具有重大意義。
　　 本論文采用神經(jīng)系統(tǒng)研究中常用的PC12細(xì)胞氧化損傷模型，對(duì)875種微生物來(lái)源的天然產(chǎn)物或其衍生物進(jìn)行篩選，結(jié)果顯示

2、，在終濃度為10μg/mL時(shí)，有90種化合物能不同程度地提高H2O2誘導(dǎo)損傷的PC12細(xì)胞存活率，對(duì)氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞具有明顯的保護(hù)活性，占供篩選化合物的10.29％;其中有26種化合物作用效果穩(wěn)定，與損傷組相比，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，占供篩選化合物的2.97％。在這些具有神經(jīng)保護(hù)活性的化合物中，來(lái)源于海洋真菌Aspergillus sp.AF119的化合物AFN-10和來(lái)源于紅樹(shù)植物內(nèi)生真菌HTF3菌株的化合物ZJ019的活性較強(qiáng)、作用效

3、果較好。篩選結(jié)果表明，微生物來(lái)源的小分子化合物中蘊(yùn)含著不少具有神經(jīng)保護(hù)活性的化合物，是開(kāi)發(fā)抗神經(jīng)退行性疾病藥物的重要來(lái)源。
　　 為了進(jìn)一步探討化合物AFN-10和ZJ019對(duì)PC12細(xì)胞損傷保護(hù)作用的機(jī)制，本論文用MTT法、熒光染色觀察、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)、Western blot等方法對(duì)H2O2氧化損傷的PC12細(xì)胞進(jìn)行了一系列生理生化檢測(cè)。結(jié)果顯示，化合物AFN-10和ZJ019能夠明顯抑制H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡，降

4、低細(xì)胞凋亡率，這一結(jié)果與MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率結(jié)果趨勢(shì)一致。進(jìn)一步研究顯示，化合物AFN-10和ZJ019在10μmol/L-50μmol/L濃度范圍內(nèi)作用效果最好，其對(duì)PC12細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制與其清除細(xì)胞內(nèi)ROS的能力有關(guān):通過(guò)提高PC12細(xì)胞內(nèi)GSH的含量來(lái)保持細(xì)胞內(nèi)的ROS處于合理的水平，從而維持線粒體膜電位的穩(wěn)定，保持線粒體結(jié)構(gòu)和功能的正常。同時(shí)，化合物AFN-10和ZJ019能夠促進(jìn)H2O2誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞Bcl-2蛋白和