雌核發(fā)育鯽鯉早期胚胎發(fā)育及后代遺傳性狀分析研究.pdf

1、雌核發(fā)育二倍體鯽鯉產(chǎn)生二倍體卵子是一種很獨特而又很重要的生物學現(xiàn)象。異源四倍體鯽鯉擁有4套染色體并能產(chǎn)生二倍體卵子，且產(chǎn)生的二倍體卵子在無需加倍處理的情況下，經(jīng)滅活精子的誘導便可發(fā)育成雌核發(fā)育二倍體魚，并可以在不加倍處理的情況下進一步進行雌核發(fā)育傳代培育。本文對雌核發(fā)育鯽鯉第三代的早期胚胎發(fā)育進行了觀察，并采用RAPD技術，進一步對雌核發(fā)育鯽鯉第二、三代的遺傳多樣性、遺傳純度進行了研究。 1雌核發(fā)育鯽鯉早期胚胎發(fā)育的觀察雌核發(fā)育

2、二倍體鯽鯉第二代(G2)產(chǎn)生的二倍體卵子經(jīng)紫外線滅活的散鱗鏡鯉精子誘導，無需染色體加倍處理，發(fā)育成為雌核發(fā)育鯽鯉第三代(G3)，其胚胎發(fā)育有著與異源四倍體鯽鯉相似的正常的時空發(fā)育程序，并能大量形成可存活的雌核發(fā)育后代。G2產(chǎn)生的卵子為粘性卵，色素含量高，共產(chǎn)生3種類型的卵子：(1)直徑為L35mm的小型卵子約占2.47％，與紅鯽產(chǎn)生的單倍體卵子大小相近，為單倍體卵子；(2)直徑為L74mm的中型卵子約占95.64％，與異源四倍體鯉鯽產(chǎn)生

3、的二倍體卵子大小一致，為二倍體卵子；(3)直徑為1.93mm的大型卵子約占1.89％，可能為更高倍性的卵子。在(19±1)℃水溫下，受精后70min第一次卵裂，原腸晚期統(tǒng)計過原腸的百分率為50％，約89h后，受精卵開始脫膜，約106.5h后，胚體完全脫膜，最終統(tǒng)計孵化率為26.11％。該試驗從胚胎學的角度證明了雌核發(fā)育二倍體魚產(chǎn)三的二倍體卵子被滅活的精子激活后在無需染色體加倍處理的情況下能自主發(fā)育，具有正常的胚胎發(fā)育的時序并產(chǎn)生存活的個

4、體。 2雌核發(fā)育鯽鯉二倍體后代(G2、G3)的RAPD分析在優(yōu)化RAPD檢測條件基礎上，從300個隨機引物中篩選出48個擴增較好且多態(tài)性強的引物，對異源四倍體雌核發(fā)育鯽鯉第二代(G2)、第三代(G3)群體相互間擴增的DNA片段的同異性進行了比較研究。結(jié)果顯示，這兩個人工雌核發(fā)育群體具有較高的同源性，且同一雌核發(fā)育群體內(nèi)部不同個體之間的同源性高于不同雌核發(fā)育群體之間的同源性。48個隨機引物在G2、G3群體中分別檢測到406和389

5、個位點，在G2、G3群體的16個個體中共擴增出6366條帶，其中G2和G3群體分別擴增出3272和3094條帶，平均每個引物在每尾魚中分別擴增出8.52和8.06條帶。兩個群體的多態(tài)性位點數(shù)分別為41和32，多態(tài)位點比例分別為10.10％和8.23％，種群內(nèi)平均遺傳距離分別為0.0224和0.0201，兩種群問的平均遺傳距離為0.0358。試驗結(jié)果表明隨著雌核發(fā)育傳代的加深，遺傳純度進一步提高，說明經(jīng)過連續(xù)的人工雌核發(fā)育可以使雌核發(fā)育雜