肝移植受者外周血淋巴細(xì)胞免疫活化基因的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、課題來源：廣東省自然科學(xué)基金(23003)及廣東省科技攻關(guān)項(xiàng)目 (2KM05101S)。目的和意義：1、尋求一種適合臨床需要的，敏感性高、特異性強(qiáng)、高效、經(jīng)濟(jì)的檢測肝移植受者外周血淋巴細(xì)胞免疫活化基因表達(dá)情況的方法；2、通過前面確定的實(shí)驗(yàn)方法，研究肝移植術(shù)后特定淋巴細(xì)胞免疫活化基因的表達(dá)對(duì)急性排斥反應(yīng)發(fā)生的預(yù)測、診斷價(jià)值，探索預(yù)測、診斷移植肝急性排斥反應(yīng)發(fā)生的敏感基因和方法。研究方法：1、通過對(duì)三種實(shí)驗(yàn)方法在檢測免疫活化基因方面

2、的敏感性、特異性、時(shí)效性和經(jīng)濟(jì)性進(jìn)行分析，確定符合臨床需求的最佳方法；2、根據(jù)前面確定的最佳實(shí)驗(yàn)方法，研究肝移植術(shù)后免疫活化基因的表達(dá)與急性排斥反應(yīng)發(fā)生的關(guān)系。研究內(nèi)容和過程：1、將14例肝移植受者(其中經(jīng)病理確診為發(fā)生急性排斥反應(yīng)者7例，未發(fā)生排斥者7例)外周血各采取15ml，分為三等份，每份5ml，分別采取逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)定性，Taqman探針熒光PCR法和SYBRGreenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR法進(jìn)行檢測。將檢測結(jié)果從

3、敏感性、特異性、時(shí)效性和經(jīng)濟(jì)性等四個(gè)方面進(jìn)行比較，尋求符合需求的最佳方法；2、利用前面確定的實(shí)驗(yàn)方法，檢測56例肝移植受者術(shù)后淋巴細(xì)胞特定免疫活化基因(主要是CD28通路相關(guān)的細(xì)胞因子有：IL-10，CD40L，F(xiàn)as，IL-2，IFN-γ，F(xiàn)asl，TGF-β1，IL-4，穿孔素，顆粒酶，bcl-xl，TNF-α,IL-1β等13種)的表達(dá)情況，結(jié)合臨床資料，研究特定淋巴細(xì)胞免疫活化基因表達(dá)對(duì)急性排斥反應(yīng)的診斷價(jià)值，探詢預(yù)測肝移植急性

4、排斥反應(yīng)的敏感基因，確定預(yù)測移植肝急性排斥反應(yīng)發(fā)生的最佳方案。主要結(jié)論：1、SYBRgreenⅠ實(shí)時(shí)定量PCR方法是可用于肝移植術(shù)后免疫活化基因表達(dá)的篩查的敏感性高、特異性強(qiáng)、高效、經(jīng)濟(jì)的檢測方法；2、免疫活化基因經(jīng)過SYBR-GreenⅠ熒光實(shí)時(shí)定量PCR法檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，其表達(dá)量在排斥反應(yīng)發(fā)生后顯著高于排斥反應(yīng)發(fā)生前(p＜0.01)。通過統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)最重要的前三種基因分別是：顆粒酶、FasL(CD95L)和穿孔素。當(dāng)顆粒