缺氧狀態(tài)下HIF-1α對肝癌細(xì)胞多藥耐藥基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文缺氧狀態(tài)下HIF-1α對肝癌細(xì)胞多藥耐藥基因表達(dá)調(diào)控的研究姓名：喻芳申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：周庚寅;郭成浩20050506山東大學(xué)碩士學(xué)位論文缺氧狀態(tài)下H I F ．1 n 對肝癌細(xì)胞’多藥耐藥基因表達(dá)調(diào)控的研究研究生 喻芳導(dǎo)師 周庚寅教授郭成浩教授中文摘要’【目的】通過在組織水平觀察缺氧誘導(dǎo)因子- l ( H y p o x i a I n d u c e d F a c t o r ，

2、H I F 一1 ∞和腫瘤多藥尉藥蛋白P - g p 在原發(fā)性肝癌和正常肝組織中的表達(dá)，以及在細(xì)胞水平觀察缺氧的肝癌細(xì)胞株H e p G 2 中H I F - l a 和腫瘤多藥耐藥基因( M u l t i —d r u gR e s i s t a n c e ，m d r l ) 在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)水平上不同時(shí)相表達(dá)的變化，探討缺氧狀態(tài)下H I F - I a 對肝癌細(xì)胞多藥耐藥基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。【方法】在組織水平，對所選3 2

3、 例原發(fā)性肝癌及1 0 例正常肝組織標(biāo)本分別進(jìn)行、。∥“P 唱p 和H I F - l a 的免疫組織化學(xué)染色。若同一來源的兩張連續(xù)切片P 一印和H I F ·l a均呈陽性表達(dá)，則對相應(yīng)的另一張連續(xù)切片進(jìn)行免疫組化雙標(biāo)染色。此外，在細(xì)胞水平用1 0 0 u m o l ／L 的C o C I 也誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞株H e p G 2 發(fā)生缺氧，實(shí)驗(yàn)分成四組，分別是正常對照組、缺氧l 組( 缺氧1 2 小時(shí)) 、缺氧2 組( 缺氧2

4、 4 小時(shí)) 、缺氧3組( 缺氧4 8 小時(shí)) 。在以上各時(shí)相用免疫組織化學(xué)的方法檢測H I F - l a 的表達(dá)，確定轉(zhuǎn)錄因子H I F - I a 在該條件下的表達(dá)規(guī)律：用逆轉(zhuǎn)錄P C R 和W e s t e r n B l o t 檢測H I F - I a 和m d r l ／P - g p 在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白質(zhì)水平表達(dá)的變化?！窘Y(jié)果】·1 ．在3 2 例原發(fā)性肝癌標(biāo)本中有1 8 例H I F ．1 a 陽性表達(dá)，表

5、達(dá)率為5 6 ．2 ％，主要為胞漿著色；2 6 例P - g p 陽性表達(dá)，表達(dá)率為8 1 ．2 5 ％，主要為胞膜著色，也可見部分胞漿著色。H I F ．1 a 和p ．g p 在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)相關(guān)聯(lián)，z ? - - 4 ．6 5 ，P < 0 ．0 5 ，r = 0 ．2 6 ．其中有1 6 例H I F ·l a 和P - 印均呈陽性表達(dá)，并且二者的表達(dá)有正向變化的趨勢，即H I F —l a 表達(dá)強(qiáng)陽性( H