絲裂素活化蛋白激酶級聯(lián)途徑在肝臟缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理中作用的研究.pdf

1、第一部分動(dòng)物模型的建立及缺血預(yù)處理對大鼠肝缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究 目的：建立大鼠肝臟缺血再灌注和缺血預(yù)處理模型，觀察缺血預(yù)處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響，為以后的研究提供基礎(chǔ)。 方法：采用大鼠肝原位部分缺血再灌注模型，120只Wistar大鼠隨機(jī)分為缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)與假手術(shù)組(SO組)，IP、IR組分別于復(fù)流0、0.5、1、2、4、8、12、24h時(shí)取材，應(yīng)用生化分析儀檢測各組血清谷丙轉(zhuǎn)

2、氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的變化，并觀察肝組織病理改變。 結(jié)果：(1)在缺血再灌注組與缺血預(yù)處理組，隨著缺血后再灌注時(shí)間的延長，大鼠血清ALT、AST明顯升高。約在4小時(shí)時(shí)達(dá)最高峰，而后漸下降。 (2)給予缺血預(yù)處理后，與單純?nèi)毖俟嘧⒔M比較，復(fù)灌后血清ALT、AST明顯下降，在0.5h～8h組差異顯著。(復(fù)灌后4小時(shí)ALT為1263±156.38u/Lvs945.00±104.38u/L，P＜0.05；AST

3、為2386.67±360.29u/Lvs1563.40±253.01u/L，P＜0.05)。 (3)病理檢查見光鏡下缺血再灌注組隨著再灌注時(shí)間的延長，肝細(xì)胞壞死加劇，炎癥細(xì)胞浸潤更明顯。與缺血再灌注組相比，缺血預(yù)處理組的肝細(xì)胞壞死范圍變小，損傷減輕。 結(jié)論：缺血預(yù)處理對大鼠肝缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。 第二部分大鼠肝臟缺血再灌注和缺血預(yù)處理后MAPK級聯(lián)通路表達(dá)變化的研究 目的：觀察肝缺血再灌

4、注和缺血預(yù)處理后MAPK級聯(lián)通路中各種亞類(p38MAPK、JNK和ERK)活化的情況，以探討其在肝臟缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理保護(hù)中的作用。 方法：120只Wistar大鼠隨機(jī)分成缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)與假手術(shù)組(SO組)，利用肝原位部分缺血再灌注模型，于復(fù)灌后0、0.5、1、2、4、8、12、24小取材，應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法對磷酸化的p-P38、p-JNK和p-ERK進(jìn)行免疫組化檢測并作半定量分析，觀察

5、其在缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理中的變化。 結(jié)果：(1)p-ERK在缺血后即有輕度地增高，但在再灌注后30min開始增高明顯，持續(xù)到再灌注后4小時(shí)，高峰出現(xiàn)在再灌注后2小時(shí)。與IR組相比，IP組p-ERK的表達(dá)在再灌注后1小時(shí)、2小時(shí)和4小時(shí)較IR組增高(p＜0.05)。 (2)p-JNK在缺血后即有輕度地增高，但在再灌注后30min開始增高明顯，持續(xù)到再灌注后4小時(shí)，高峰出現(xiàn)在再灌注后2小時(shí)。與IR組相比，IP組p-JN

6、K的表達(dá)在再灌注后1小時(shí)、2小時(shí)和4小時(shí)較IR組降低(p＜0.05)。 (3)p-P38在缺血后即有輕度地增高，但在再灌注后30min開始增高明顯，高峰出現(xiàn)在再灌注后1小時(shí)，2小時(shí)后開始下降，表達(dá)程度維持在缺血后水平。與IR組相比，IP組p-P38的表達(dá)較IR組高，但僅在再灌注后1小時(shí)明顯增高(p＜0.05)。 結(jié)論：缺血預(yù)處理可通過增高ERK和P38的磷酸化水平，降低JNK的磷酸化水平減輕缺血再灌注導(dǎo)致的肝臟損傷，MA

7、PKs通路可能在缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理的保護(hù)作用中取至關(guān)重要的作用。 第三部分缺血預(yù)處理和缺血再灌注對大鼠肝臟即早基因c-fos和c-jun表達(dá)變化的影響 目的：觀察大鼠肝臟缺血再灌注和缺血預(yù)處理對即早基因c-fos、c-jun表達(dá)的影響。 方法：采用大鼠原位部分缺血再灌注模型，120只Wistar大鼠隨機(jī)分為缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)和假手術(shù)組(SO)，每組又分為8個(gè)亞組(n=6)

8、，于復(fù)灌后0h、0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h取材，應(yīng)用RT-PCR法檢測各組c-fos、c-junmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：(1)在IR組再灌注后0.5小時(shí)～2小時(shí)c-fos和c-jun的表達(dá)均增高，1小時(shí)達(dá)高峰；4小時(shí)后只有c-jun有持續(xù)較高的表達(dá)，c-fos的表達(dá)開始下降； (2)IP組c-fos和c-junmRNA的表達(dá)較IR組低； (3)與IR組相比，IP組c-junmRNA在0.5h

9、、1h和2h組明顯降低(p＜0.05)。 結(jié)論：缺血預(yù)處理能有效地保護(hù)肝臟免受缺血再灌注造成的損傷，這種保護(hù)效應(yīng)的機(jī)制可能與影響即早基因的轉(zhuǎn)錄有關(guān)。 第四部分大鼠肝缺血再灌注損傷和缺血預(yù)處理對細(xì)胞凋亡、增殖的影響 目的：觀察肝缺血再灌注和缺血預(yù)后處理對肝細(xì)胞增殖、凋亡的影響，以探討二種背景下的細(xì)胞周期變化。 方法：120只Wistar大鼠隨機(jī)分成缺血再灌注組(IR)，缺血預(yù)處理組(IP)與假手術(shù)

10、組(SO組)，利用肝原位部分缺血再灌注模型，于復(fù)灌后0、0.5、1、2、4、8、12、24小取材，應(yīng)用流式細(xì)胞儀，以Ki-67抗原的檢測和Sub-G1法分別為細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡(Ap指數(shù))的定量分析方法，觀察缺血再灌注損傷變化以及缺血預(yù)處理對這一過程的影響。 結(jié)果：(1)在IP組，Ki-67相對表達(dá)率在復(fù)灌后有兩個(gè)峰值，分別于復(fù)灌后的1、12小時(shí)出現(xiàn)，而IR組在復(fù)灌后只有一個(gè)峰值，于復(fù)灌后24小時(shí)出現(xiàn)。復(fù)灌后，IP各組均有明顯增

11、高，而IR于復(fù)灌后2小時(shí)才有增高； (2)在IP組，復(fù)灌后肝細(xì)胞凋亡率也有兩個(gè)峰，分別于復(fù)灌后的0、4小時(shí)，而IR組在復(fù)灌后肝細(xì)胞凋亡率逐漸增高，峰值于復(fù)灌后12小時(shí)出現(xiàn)； (3)IP與IR組相比，Ki-67在復(fù)灌后的0、1、24小時(shí)差別有意義；Ap在復(fù)灌后的1小時(shí)以上差別有意義。 結(jié)論：缺血預(yù)處理可減輕缺血再灌注損傷后的肝細(xì)胞凋亡，并在復(fù)灌早期有細(xì)胞增殖現(xiàn)象，可能是其對缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用的機(jī)制之一。