沙棘中α-葡萄糖苷酶抑制劑的篩選.pdf

1、實(shí)驗(yàn)選用中國沙棘（Hippophae rham noides L.subsp.chinensis Rousi）枝葉為研究材料，利用酶-抑制劑篩選模型、對(duì)沙棘中的活性部位進(jìn)行AGI篩選，選擇高活性的AGI部位，進(jìn)行體外酶學(xué)動(dòng)力學(xué)研究、體內(nèi)小鼠耐糖量模型和糖尿病小鼠模型實(shí)驗(yàn)研究，探索高活性的AGI部位對(duì)血糖的影響及其作用機(jī)理?，F(xiàn)將主要的研究內(nèi)容和結(jié)果詳細(xì)介紹如下：
　　 1.依次用極性不同的溶劑乙酸乙酯、甲醇、蒸餾水從沙棘粗粉中提取

2、，得到三個(gè)不同提取部位；用乙醇回流熱水浸法提取，Sevage法除蛋白，得到沙棘粗多糖。乙酸乙酯、甲醇、蒸餾水和沙棘粗多糖提取得率分別為1.52％、1.71％、2.41％和2.79％。
　　 2.利用AGI的篩選模型，分別對(duì)四個(gè)不同提取部位進(jìn)行AGI活性篩選。結(jié)果：乙酸乙酯、甲醇、蒸餾水和沙棘粗多糖抑制活性分別為20.34％、13.43％、71.28％和90.43％。
　　 3.選擇高活性的沙棘粗多糖提取部位，采用硫酸-苯

3、酚法測(cè)得沙棘粗多糖的含糖量為28.52％。并對(duì)沙棘粗多糖進(jìn)行理化性質(zhì)和體外酶學(xué)動(dòng)力學(xué)研究，結(jié)果：沙棘粗多糖濃度在0.0098 mg/mL-0.625mg/mL之間時(shí)，酶的抑制率隨著濃度的增大而升高，IC50。為0.01912mg/mL，濃度為0.625mg/mL時(shí)抑制率達(dá)92.52％，且與酶結(jié)合迅速，酸堿范圍廣，熱穩(wěn)定性好，沙棘粗多糖是一種高活性的競(jìng)爭可逆性AGI，抑制常數(shù)Ki=5.26mg/mL。
　　 4.采用小鼠耐糖量模型

4、，以沙棘粗多糖為實(shí)驗(yàn)藥物，觀察沙棘粗多糖對(duì)蔗糖、葡萄糖、麥芽糖、淀粉負(fù)荷劑量后的正常小鼠血糖影響，結(jié)果：與對(duì)照組比較，淀粉組血糖值降低較為明顯（P<0.01），蔗糖組次之（P<0.05）。表明沙棘粗多糖能夠提高正常小鼠的耐糖量；通過抑制腸道內(nèi)的AG而發(fā)揮作用，體內(nèi)降血糖作用與阿卡波糖相似。
　　 5.用四氧嘧啶糖尿病小鼠動(dòng)物模型，觀察沙棘粗多糖對(duì)高血糖小鼠的影響，結(jié)果：與模型組比較，給藥2周和4周后，沙棘粗多糖高劑量組對(duì)高血糖小

5、鼠降糖作用明顯（P<0.01，P<0.05），降糖率分別為31.72％和45.70％，沙棘粗多糖低劑量組降糖作用次之（P<0.05，P<0.05），降糖率分別為28.02％和39.38％。表明沙棘粗多糖對(duì)四氧嘧啶致高血糖小鼠具有良好的降血糖作用，且作用強(qiáng)度與劑量呈相關(guān)性。
　　 6.用鏈脲佐菌素糖尿病小鼠動(dòng)物模型，觀察沙棘粗多糖對(duì)高血糖小鼠的影響，結(jié)果：與模型組比較，給藥2周和4周后，沙棘粗多糖高劑量組對(duì)高血糖小鼠降糖作用明顯（