NGF促進再生周圍神經(jīng)血管生成及機制研究.pdf

1、血供對于損傷周圍神經(jīng)的再生修復十分重要。較豐富的血供，可使損傷神經(jīng)內(nèi)的變性崩解軸索和髓鞘碎屑得以較快地清除，以減輕繼發(fā)性炎性損害；同時為雪旺氏細胞提供營養(yǎng)物質(zhì)，增強雪旺氏細胞的生物學功能；重建再生的微環(huán)境，這樣不僅利于損傷神經(jīng)的軸索再生，而且，加快再生軸索的髓鞘再形成，促進再生神經(jīng)纖維的生長、成熟和神經(jīng)功能的恢復。粗、長段缺損的周圍神經(jīng)再生修復對于血供的要求更高。用帶血供材料修復周圍神經(jīng)缺損的方法很多，較常見的如帶血管的神經(jīng)移植，含有血

2、管的神經(jīng)片段外膜管橋接神經(jīng)缺損，含有血管和雪旺氏細胞的外膜管橋接神經(jīng)缺損等方法，盡管方法很多，但效果都不甚理想。因此，如何改善損傷周圍神經(jīng)再生修復過程中的血供成為廣大神經(jīng)科學工作者關(guān)注的問題。 神經(jīng)生長因子(Nervegrowthfactor，NGF)是研究較早且較深入的神經(jīng)營養(yǎng)因子，對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、維持神經(jīng)元存活和神經(jīng)損傷后的修復均有重要作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)NGF對外周非神經(jīng)組織(如缺血肌肉組織、角膜、脈絡(luò)膜和虹膜)有較強的血

3、管生成作用，NGF可通過促進血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的表達而間接地促進血管生成；甚至認為NGF具有直接促進血管生成的作用，而將NGF稱作血管誘導因子；但其是否能夠促進再生周圍神經(jīng)中的血管生成，國內(nèi)外鮮見報道。 我們在比較研究NGF和CNTF促周圍神經(jīng)再生的差異性時初步觀察到NGF治療時再生周圍神經(jīng)血管增多的現(xiàn)象，但這種作用是否確實、是否存在一定的時效和量效關(guān)

4、系，及該血管生成作用與神經(jīng)再生的關(guān)系如何，作用的機制怎樣等問題，均需進行深入研究。如能解決上述問題，對拓展NGF的生物學作用和促進損傷周圍神經(jīng)的再生修復都具有重要的理論意義和指導作用。為此，本實驗應(yīng)用硅膠管來橋接大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損，在硅膠管內(nèi)加入醫(yī)用幾丁糖凝膠作為NGF的緩釋劑，采用HE、Holmes嗜銀染色和電鏡觀察橋接管內(nèi)各時相點的神經(jīng)再生和血管生成情況；利用免疫組化的方法檢測CD34(標記毛細血管)、vWf(標記較大管徑的新

5、生血管)、TrkA(NGF的受體)、VEGF等抗原的表達變化并對其進行半定量分析；用激光共聚焦掃描顯微鏡檢測結(jié)合熒光雙標觀察VEGF與CD34，vWf，TrkA的共表達情況；同時探討了NGF促血管生成的劑量效應(yīng)，并初步分析了其作用機制。主要結(jié)果及結(jié)論如下： 1.NGF+幾丁糖組CD34和vWf陽性染色在術(shù)后7、14、30d，都明顯比生理鹽水組或幾丁糖組多，說明NGF具有促再生周圍神經(jīng)中的血管生成作用。它既能促進毛細血管生成，也能

6、促進較大管徑血管生成。 2.NGF給藥后14d比7d的微血管計數(shù)和vWf陽性染色有顯著增加，也明顯多于給藥后30d，60d時最少。表明NGF促再生周圍神經(jīng)血管生成具有一定的時間效應(yīng)，給藥后14d是血管生成的高峰期。 3.在促進再生坐骨神經(jīng)中的血管生成時，50ngNGF組即能顯著增加CD34和vWf的表達，500ng時表達最強，提示NGF促再生周圍神經(jīng)血管生成作用具有明顯的劑量效應(yīng)。 4.NGF+幾丁糖組再生周圍神

7、經(jīng)中TrkA、CD34、vWf、VEGF的表達均比幾丁糖組顯著增加，而且隨NGF劑量的增加其表達也明顯增加；激光共聚焦和熒光雙標觀察到VEGF與TrkA、CD34、vWf都有明顯共表達；NGF+幾丁糖+抗VEGF組CD34的表達被完全抑制，TrkA、vWf的表達也明顯減少，提示NGF可能經(jīng)trkA-VEGF-CD34通路來促進再生周圍神經(jīng)中毛細血管的生成，而促進較大管徑血管生成的通路除trkA-VEGF外，可能還存在其它途徑。