Th17細(xì)胞參與慢性乙型肝炎免疫炎癥損傷的作用和機(jī)制.pdf

1、乙肝病毒(HBV)是影響人類健康的主要病毒之一，全世界大約有4億人群感染HBV，而中國大約有3000萬乙型肝炎患者。在感染HBV的部分成年人中，表現(xiàn)為一種急性、自限性的肝臟炎癥，表現(xiàn)為病毒負(fù)荷的急劇下降和長久的保護(hù)性體液和細(xì)胞免疫；然而在另一部分受染的成年人和大多數(shù)經(jīng)垂直傳播而致病的患者中，持續(xù)的病毒感染會最終導(dǎo)致慢性乙型肝炎(CHB)。這些慢性感染的患者有一部分表現(xiàn)為無癥狀的自限性肝??；而絕大多數(shù)會發(fā)展為肝硬化甚至最終導(dǎo)致肝癌。

2、>　　 雖然HBV在機(jī)體持續(xù)性感染以致CHB發(fā)生的病理機(jī)制尚未完全闡明，但細(xì)胞免疫在肝細(xì)胞損害及病毒清除中所發(fā)揮的重要作用已得到公認(rèn)。CHB的發(fā)病機(jī)制主要是患者體內(nèi)的HBV變異以及患者體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞中的樹突狀細(xì)胞(DC)功能受抑制，導(dǎo)白細(xì)胞介素-12(IL-12)、α-干擾素(IFN-α)水平下降，Ⅰ型T輔助細(xì)胞/Ⅱ型T輔助細(xì)胞(Th1/Th2)比例下降，致使患者免疫功能紊亂，HBV感染、復(fù)制得以持續(xù)。在CHB病程進(jìn)展中，Th1/T

3、h2的平衡是機(jī)體能否有效清除病毒和病毒感染細(xì)胞的主要因素之一。正常情況下二者相互制約，平衡穩(wěn)定，維持機(jī)體的正常免疫功能。最近研究發(fā)現(xiàn)，CHB患者體內(nèi)的Th1類細(xì)胞功能下降，Th1/Th2比例失衡，直接影響了細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)、NK細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAX)和B細(xì)胞功能的正常發(fā)揮，導(dǎo)致病毒清除及調(diào)節(jié)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力減弱。Th1細(xì)胞占優(yōu)勢，將促進(jìn)細(xì)胞免疫反應(yīng)，增強(qiáng)CD8+T細(xì)胞的活性，從而清除細(xì)胞內(nèi)病毒，但同時增加

4、了肝臟的炎癥反應(yīng)從而加重肝細(xì)胞的損傷；Th2細(xì)胞占優(yōu)勢，將促進(jìn)體液免疫反應(yīng)，并抑制細(xì)胞免疫反應(yīng)，細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)活性減弱，肝細(xì)胞損傷減輕?？共《痉磻?yīng)的減弱是病毒持續(xù)存在的主要原因。另外，CHB患者的外周血中T淋巴細(xì)胞，尤其是CD8+T細(xì)胞上的激活受體CD28。表達(dá)水平較正常人明顯降低，其細(xì)胞中CD28mRNA水平也降低，兩種情況均可能造成T淋巴細(xì)胞激活所必需的第二信號產(chǎn)生減少，使T淋巴細(xì)胞特別是CTL的激活受影響，使HBV不能被

5、有效地清除，造成HBV感染持續(xù)存在，遷延不愈，誘導(dǎo)機(jī)體對HBV感染產(chǎn)生免疫耐受。此外，抗原提呈細(xì)胞(APC)如樹突狀細(xì)胞(DC)的功能缺陷也會使第二信號產(chǎn)生障礙。
　　 近期，人們發(fā)現(xiàn)了一群獨立于Th1、Th2細(xì)胞的效應(yīng)性T細(xì)胞亞群——Th17細(xì)胞亞群，這群細(xì)胞由初始CD4+T細(xì)胞分化而來，主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-6及TNF-α、GM-CSF，不分泌IL-4、IFN-γ。大量的實驗提示Thl7細(xì)胞在人類自身免疫

6、性疾病、炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展中均發(fā)揮著重要的作用。IL-17同IL-1β、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)α或Toll樣受體(Toll like recptors，TLRx)激活劑細(xì)菌脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)功能相似。特別是，IL-17可以誘導(dǎo)固有免疫炎癥細(xì)胞因子IL-6、急性反應(yīng)蛋白、粒-巨細(xì)胞刺激因子(G-CSF)和前列腺素E2等表達(dá)。IL-17還可以同炎癥因子TNF-α

7、等有協(xié)同作用，放大加強(qiáng)其致炎效應(yīng)。因此，適應(yīng)免疫系統(tǒng)可以通過IL-17和固有免疫系統(tǒng)相聯(lián)系并促進(jìn)炎癥反應(yīng)過程。目前研究認(rèn)為，Th17細(xì)胞分泌產(chǎn)生的主要效應(yīng)因子IL-17可刺激IL-8、MCP-1和Gro-α等趨化因子的產(chǎn)生，招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞到達(dá)炎癥部位；亦能通過刺激IL-6、NO、PGE2以及其它促炎因子IL-1β、TNF-α、IFN-γ和CD40L的表達(dá)，從而擴(kuò)大和加重局部炎癥反應(yīng)。IL-17還可作為機(jī)體固有免疫與適應(yīng)性免疫反

8、應(yīng)的橋梁，促進(jìn)T和B細(xì)胞的活化增殖，在機(jī)體的炎癥反應(yīng)、自身免疫損傷等具有重要的調(diào)節(jié)作用。大量的實驗研究結(jié)果表明Th17細(xì)胞在人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、呼吸系統(tǒng)疾病如哮喘以及移植排斥等疾病中有明顯的異常表達(dá)。因此，Th17是慢性炎癥微環(huán)境中重要的效應(yīng)細(xì)胞，在病原體等誘導(dǎo)的慢性炎癥過程中發(fā)揮重要作用。
　　 目前，有關(guān)Th17與肝病關(guān)系的研究還十分少見，尤其是Th17與HBV致肝臟慢性免疫性炎癥關(guān)系的研究尚未見報道。首先，Yasumi Y

9、等將暴發(fā)性肝衰竭、重度急性肝炎和一般急性肝炎的病人進(jìn)行對比，并對其血清沖IL-17的含量進(jìn)行檢測，研究發(fā)現(xiàn)血清中IL-17的水平對于評價急性肝炎的嚴(yán)重程度具有價值，Zenewicz LA等構(gòu)建了急性肝損的動物模型，并從動物模型中得到了相似的結(jié)論，但認(rèn)為IL-17對急性肝細(xì)胞損傷無保護(hù)作用亦無促進(jìn)作用，而IL-22對肝細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用，但其中的機(jī)制仍待進(jìn)一步探討。繼而，Takako Nagata等從動物模型中發(fā)現(xiàn)ConA誘導(dǎo)的急性肝

10、炎中必須有IL-17RA的參與，并且證明了IL-17RA與小鼠Th17細(xì)胞IL-17的產(chǎn)生有關(guān)系。最新的文獻(xiàn)已證實由病毒誘導(dǎo)產(chǎn)生的IL-10和TGF-β能有效地抑制HCV特異的Th17細(xì)胞的功能。真正引起我們興趣的是近期兩篇文獻(xiàn)的報道，ArnaudLemmers等證實由Th17細(xì)胞參與的IL-17的通路在酒精性肝炎患者疾病的進(jìn)展起到關(guān)鍵作用，發(fā)現(xiàn)在患者病損的肝組織出現(xiàn)大量Th17細(xì)胞的浸潤，且疾病嚴(yán)重程度和肝臟纖維化的程度均與Th17細(xì)

11、胞浸潤程度成正比；患者肝組織周圍大量分泌IL-17炎性細(xì)胞的浸潤是造成中性粒細(xì)胞歸巢的主要因素。Ruth YZ等以IL-2RαKO鼠研究發(fā)現(xiàn)，從肝組織分離的CD4+T細(xì)胞中比脾臟分離的有更高的Th17比例，肝臟CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL-17的量明顯高于脾臟的；將正常B6小鼠脾臟CD4+T細(xì)胞與B6鼠肝臟分離的非實質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)，培養(yǎng)液中IL-17的量升高了10倍。這表明肝臟的微環(huán)境似乎更利于Th17細(xì)胞的產(chǎn)生。
　　 因此基于上述原

12、因，我們擬研究Th17細(xì)胞可能在CHB慢性免疫炎癥損傷過程中扮演的作用。本研究對臨床不同疾病程度CHB患者和健康成人外周血的Th17細(xì)胞以及與其誘導(dǎo)分化相關(guān)的細(xì)胞因子進(jìn)行檢測，分析這些變化所可能產(chǎn)生的臨床意義；進(jìn)一步分析外周血Th17細(xì)胞表達(dá)的差異與患者HBV病毒DNA載量、肝臟損傷標(biāo)志物的關(guān)系，以探討Th17細(xì)胞與CHB患者疾病進(jìn)程中可能的關(guān)系；同時，采用激光共聚焦顯微鏡觀察CHB患者病損肝組織中Th17細(xì)胞的浸潤程度，以及與病理炎癥

13、程度分級的關(guān)系；通過觀察臨床不同疾病程度CHB患者和健康成人外周血CD4+T細(xì)胞體外誘導(dǎo)的Th17細(xì)胞顆粒酶B等表達(dá)的差異、以及對正常肝細(xì)胞的殺傷能力的變化，分析CHB患者肝組織中的Th17細(xì)胞與肝臟損傷之間的關(guān)系，并進(jìn)一步探究CHB患者體內(nèi)Th17細(xì)胞致肝細(xì)胞損傷的機(jī)制。本研究的目的在于闡明Th17細(xì)胞在慢性病毒性肝炎病理過程中所扮演的角色，有望成為幫助CHB患者重建免疫系統(tǒng)的又一新的靶點。本研究將從以下三個方面展開：
　　

14、第一部分：CHB患者體內(nèi)Th17細(xì)胞的比例及其相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)情況。
　　 第二部分：探討CHB患者體內(nèi)Th17細(xì)胞與肝臟損傷之間的關(guān)系。
　　 第三部分：研究CHB患者體內(nèi)Th17細(xì)胞致肝細(xì)胞損傷的機(jī)制。
　　 在本研究中，我們首次將CHB和Th17細(xì)胞建立聯(lián)系，并研究在CHB病程進(jìn)展中是否有Th17細(xì)胞所參所致肝細(xì)胞損傷，我們的試驗結(jié)果給出了較為肯定的結(jié)論。據(jù)我們所知，本研究不僅是首次發(fā)現(xiàn)Th17細(xì)胞與CH