IBV分子流行病學(xué)及TWI型毒株的生物學(xué)特征與傳代致弱.pdf

1、禽傳染性支氣管炎（IB）是由禽傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的雞的一種急性、高度接觸傳染性疾病。20世紀(jì)90年代以來，IB在國(guó)內(nèi)相繼爆發(fā)，流行十分廣泛，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。IBV防控的難點(diǎn)在于血清型、基因型眾多，且不同血清型、基因型間沒有交叉保護(hù)或者交叉保護(hù)很弱，長(zhǎng)期的流行病學(xué)監(jiān)控及選擇針對(duì)本地區(qū)流行毒株的疫苗對(duì) IB的防控具有重要的意義。
　　本實(shí)驗(yàn)室于2013-2015年期間從我國(guó)13個(gè)省市自治區(qū)發(fā)病雞場(chǎng)送檢病料中分離

2、鑒定了290株IBV，并對(duì)分離株進(jìn)行S1基因測(cè)序與分析，結(jié)果表明290株中除2株為變異株外，288株聚類與7個(gè)進(jìn)化分支，即7個(gè)基因型。QX型和TW I型是我國(guó)目前主要的兩種 IBV優(yōu)勢(shì)基因型，分別占分離毒株的44％和26.4%；其他五個(gè)基因型4/91型、CH III型、CH IV型、CH VI型和Mass型分別占13%、5.8%、1.7%、3.7%和4.4%?；蛳嗨菩苑治霭l(fā)現(xiàn)，290株分離株之間核苷酸相似性在63.1%-100%之間，

3、氨基酸相似性在60.2%-100%。TW I型分離株與國(guó)內(nèi)常用疫苗株（Mass型、LDT3-A株、4/91株、YX10-D90株）S1基因相似性較低。重組分析發(fā)現(xiàn)，分離株中存在大量重組毒株，形成新的亞分支、亞型和變異株。
　　TW I型IBV于20世紀(jì)90年代后首先出現(xiàn)在我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)，近幾年大陸地區(qū)TW I型分離株報(bào)道逐漸增多，但是對(duì)其生物學(xué)特征還不清楚。本研究選擇4株大陸TW I型分離株（ZS13、GZ14、ZZ15和 LYG1

4、5株）進(jìn)行研究，進(jìn)行分離鑒定、全基因測(cè)序與分析、血清中和實(shí)驗(yàn)及商用疫苗免疫保護(hù)試驗(yàn)，并建立了qPCR檢測(cè)方法。研究發(fā)現(xiàn)4株TW I型毒株僅在S1基因與臺(tái)灣TW I型參考毒株序列相似度高，其他各基因及全基因與國(guó)內(nèi)參考毒株相似度高，與臺(tái)灣地區(qū)、國(guó)外參考毒株基因相似度低。全基因重組分析表明GZ14株并不是完全來源于臺(tái)灣TW I型毒株，而是臺(tái)灣TW I型分離株與大陸毒株重組產(chǎn)生。血清中和試驗(yàn)表明ZS13株、GZ14株與國(guó)內(nèi)常用疫苗株血清型不同，

5、ZS13株與GZ14株為同一血清型。商用疫苗免疫保護(hù)試驗(yàn)表明目前國(guó)內(nèi)商用疫苗毒株對(duì)TW I型毒株的保護(hù)效果不佳。
　　本研究采用37℃ SPF雞胚傳代的方法對(duì)GZ14株進(jìn)行致弱，以期獲得一株疫苗候選毒株。經(jīng)過一系列連續(xù)傳代，GZ14株傳代毒已適應(yīng)雞胚，造成明顯的雞胚病變，病毒滴度穩(wěn)定。致弱評(píng)價(jià)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)5、F60代對(duì)雛雞有較強(qiáng)致病力，而F80、F100代已對(duì)雛雞沒有致病力，接種后排毒時(shí)間縮短，在腎臟、氣管中的病毒載量顯著低于接種