雜色鮑人工雌核發(fā)育的研究.pdf

1、人工雌核發(fā)育技術(shù)在育種實(shí)踐和遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究中有著廣泛的應(yīng)用前景，然而貝類(lèi)人工雌核發(fā)育誘導(dǎo)至今還沒(méi)有真正成功，原因之一是理化方法誘導(dǎo)的貝類(lèi)雌核后代成活率極低。針對(duì)貝類(lèi)人工雌核發(fā)育體成活率低的問(wèn)題，本研究一方面細(xì)致優(yōu)化了理化方法誘導(dǎo)雜色鮑(Haliotisdiversicolor，簡(jiǎn)為S)雌核發(fā)育程序的參數(shù)，研究了理化方法誘導(dǎo)雜色鮑雌核發(fā)育的細(xì)胞機(jī)理，為進(jìn)一步改進(jìn)雜色鮑雌核發(fā)育誘導(dǎo)方法、提高誘導(dǎo)后代成活率奠定了基礎(chǔ)；另一方面查實(shí)了雜色鮑♀×

2、盤(pán)鮑(H.discusdiscus，簡(jiǎn)為J)♂種間雜交F1成貝實(shí)質(zhì)上是含有少量父本基因的雌核發(fā)育體，并在受精生物學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)研究基礎(chǔ)上提出了雜色鮑♀×盤(pán)鮑♂產(chǎn)生雌核發(fā)育體的機(jī)理，為雜色鮑雌核發(fā)育誘導(dǎo)提供了新的途徑。主要結(jié)果和結(jié)論如下： 1.理化方法誘導(dǎo)雜色鮑雌核發(fā)育 理化方法誘導(dǎo)雜色鮑雌核發(fā)育，利用UV遺傳失活精子條件是：光強(qiáng)為1075μW·cm-2·s-1，輻射時(shí)間為50～90sec，受輻射精液濃度為5×106個(gè)精子

3、·mL-1，精液厚度為1mm。雜色鮑雌核發(fā)育卵在減數(shù)分裂過(guò)程中有兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)是CB誘導(dǎo)的適宜作用起始時(shí)間，分別為0.14倍卵裂時(shí)間(T2C)和0.25倍卵裂時(shí)間。此外，UV輻射精子，會(huì)使精子活力下降、老化速度加快，因此用UV遺傳失活精子授精，授精精子濃度應(yīng)提高到5.7×105～4.6×106個(gè)精子·mL-1，同時(shí)輻射后應(yīng)盡快用于授精。 受精細(xì)胞學(xué)研究結(jié)果表明，理化方法誘導(dǎo)雌核發(fā)育卵中，入卵精核在原核期正常形成雄性原核，但雄性原核在

4、第一次卵裂早期退化成濃縮的染色質(zhì)小體(DCB)，表明UV輻射影響了精子染色體的正常濃縮。另外，受精卵經(jīng)細(xì)胞松弛素B誘導(dǎo)后出現(xiàn)減數(shù)分裂紡錘體消失、三個(gè)原核并存等特殊現(xiàn)象。 2.雜色鮑×盤(pán)鮑雜交受精條件 為了克服配子排放不同步和配子不親和造成的雜交困難，本研究篩選了雜色鮑精液短期保存條件和雜色鮑×盤(pán)鮑授精條件，結(jié)果表明，添加3％DMSO、精液濃度調(diào)整為7.5×108個(gè)·mL-1、在7℃下保存，可以精子的活力半衰期延長(zhǎng)43h；

5、將授精時(shí)間控制在卵子排放5min內(nèi)，授精精子濃度控制為自繁的100倍左右，可以將受精率穩(wěn)定在50％左右。 3.雜色鮑×盤(pán)鮑雜交F1的生物學(xué)表現(xiàn) 雜交F1胚胎發(fā)育慢于母本。SJ雜交F1成活率約為母本對(duì)照組的1.19％。稚貝階段，正反雜交F1的形態(tài)性狀(貝殼和齒舌)、數(shù)量性狀(殼長(zhǎng)/殼寬、體重/殼長(zhǎng)和體重/殼寬)和生理特征(生長(zhǎng)節(jié)律)都相似于母本，表現(xiàn)雌核發(fā)育特性。此外，正反交F1的平均生長(zhǎng)速度均慢于母本，性比符合1：1。

6、 4.雜色鮑×盤(pán)鮑雜交的遺傳學(xué)基礎(chǔ)研究 雖然SJ雜交受精是兩性融合的過(guò)程，而且雜交幼體同時(shí)含有雜色鮑和盤(pán)鮑的染色體，但是SJ和和JS群體雜交F1成體的基因主要來(lái)自母本，每個(gè)個(gè)體中殘余的父本基因平均約0.79±0.87％，為含有少量父本基因的異精雌核發(fā)育體。 根據(jù)受精細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)初步推斷雜色鮑與盤(pán)鮑種間雜交產(chǎn)生雌核發(fā)育二倍體的機(jī)理為(1)盤(pán)鮑精子不僅激活了雜色鮑卵子的發(fā)育，而且進(jìn)入合子的細(xì)胞周期；(