慢性乙型肝炎患者DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　慢性乙型肝炎是一個(gè)全球性的健康問(wèn)題。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)是調(diào)節(jié)DNA甲基化的主要因素之一。我們本次研究旨在研究慢性乙型肝炎患者DNMT的表達(dá)狀況，并明確其表達(dá)是否與肝臟炎癥程度相關(guān);同時(shí)，我們分析了DNMT表達(dá)是否與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶P1(GSTP1)與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶M3(GSTM3)的甲基化相關(guān)。
　　研究方法:
　　自2012年6月至2014年7月，我們于山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝病科入組

2、193例研究對(duì)象。其中，慢性乙型肝炎患者153名，健康對(duì)照者40名。分別從所有研究對(duì)象的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中提取DNA和mRNA。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-PCR)檢測(cè)DNMT1、DNMT3a和DNMT3b的mRNA水平。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血漿可溶性腫瘤壞死因子α(TNF-α)及丙二醛(MDA)水平。應(yīng)用甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)GSTP1和GSTM3基因啟動(dòng)子區(qū)域的的甲基化狀態(tài)。
　　研

3、究結(jié)果:
　　慢性乙型肝炎患者組[1.3×10-3(0.6×10-3，6.8×10-3);1.9×10-3(0.8×10-3，5.8×10-3)]的DNMT1及GSTM3a的mRNA水平均高于正常對(duì)照組[0.5×10-3(0.1×10-3,4.2×10-3);0.5×10-3(0.2×10-3,4.2×10-3)]，差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。GSTP1、GSTM3基因啟動(dòng)子甲基化與DNMT1、DNMT3a、 TNF

4、-α、MDA和HBeAg均呈明顯正相關(guān)。DNMT1、 DNMT3a與MDA(rs=0.405,P＜0.001; rs=0.391,P＜0.001)及TNF-α(rs=0.281，P＜0.001; rs=0.370，P＜0.001)呈明顯正相關(guān)。然而，DNMT3b與MDA(rs=0.110，P=0.177)及TNF-α(rs=0.015，P=0.857)無(wú)明顯相關(guān)。DNMT的表達(dá)水平（DNMT1 rs=0.077，P=0.343; DNM

5、T3a，rs=0.099，P=0.225;DNMT3b，rs=0.113，P=0.163）與HBV DNA無(wú)明顯相關(guān)。在慢性乙型肝炎患者中，HBeAg陽(yáng)性患者的GSTP1啟動(dòng)子甲基化率明顯高于HBeAg陰性患者。HBeAg陽(yáng)性患者[1.7×10-3(0.9×10-3，29×10-3);4×10-3(1.2×10-3，17.5×10-3)]的DNMT1、DNMT3a mRNA的表達(dá)水平明顯高于HBeAg陰性患者[0.9×10-3(0.5×

6、10-3，2.3×10-3);1.4×10-3(0.6×10-3，4.3×10-3)]。同時(shí)，存在GSTP1甲基化的患者，DNMT1、DNMT3a的 mRNA水平[9.2×10-3(1.3×10-3,13.0×10-3);10.9×10-3(3.5×10-3，49.4×10-3)]明顯高于GSTP1非甲基化患者[1.2×10-3(0.6×10-3,5.1×10-3);1.8×10-3(0.7×10-3,5.1×10-3)]。
　　

7、研究結(jié)論:
　　在CHB患者中，DNMT與各氧化損傷指標(biāo)呈明顯正相關(guān)，提示DNMT可能參與了CHB的發(fā)病機(jī)制;另外，在慢性乙型肝炎患者中，DNMT與GSTP1及GSTM3基因的甲基化狀態(tài)及mRNA表達(dá)存在明顯相關(guān)性，提示DNMT或許可作為慢性乙型肝炎患者病情狀況的診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)，值得在今后的研究中進(jìn)行深入探索。HBeAg陽(yáng)性慢性乙型肝炎患者較HBeAg陰性患者具有更高的DNMT表達(dá)，提示DNMT水平或可作為HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換