普羅布考對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)及海馬區(qū)bcl-2和bax蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:血管性癡呆(Vascular dementia，VD)已經(jīng)成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題，以缺血缺氧性或出血性腦損傷造成的病理組織學(xué)損傷和進(jìn)行性智能減退為特征。VD是僅次于阿爾茨海默病的第二大癡呆類型，它的發(fā)病率逐年增加。VD的確切的發(fā)病機(jī)制還不是很清楚，但目前公認(rèn)腦缺血缺氧是VD的主要病因。腦缺血缺氧損傷后產(chǎn)生大量的自由基，過量的自由基導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化、蛋白質(zhì)喪失功能、DNA破壞等。海馬是學(xué)習(xí)記憶的重要結(jié)構(gòu)，并且對(duì)腦缺血缺氧極其敏感。

2、因此，腦缺血缺氧極易導(dǎo)致海馬神經(jīng)元凋亡，從而使學(xué)習(xí)記憶能力下降。神經(jīng)元凋亡是一種受基因調(diào)控的自主性、程序性細(xì)胞死亡過程，是腦缺血再灌注損傷的重要環(huán)節(jié)。bcl-2家族成員在細(xì)胞凋亡的基因調(diào)控過程中起著至關(guān)重要的作用。bcl-2抑制凋亡，bax促進(jìn)凋亡，二者共同調(diào)控凋亡程序，是最經(jīng)典的凋亡調(diào)控基因。
　　 腦缺血缺氧后神經(jīng)元凋亡與氧化應(yīng)激有關(guān)，普羅布考(probucol)具有降脂、清除自由基、抗氧化等作用。有研究證明普羅布考具有很強(qiáng)

3、的抗氧化作用。目前，普羅布考用于治療血管性癡呆的研究很少。本研究旨在通過觀察普羅布考對(duì)血管性癡呆大鼠認(rèn)知功能及海馬區(qū)bcl-2、bax蛋白表達(dá)的影響，探索其可能的作用機(jī)制，為普羅布考的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:選取健康雄性SD大鼠，采用永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法建立血管性癡呆大鼠模型，將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、普羅布考組，每組12只。普羅布考組灌胃給予普羅布考500mg/kg/d，同時(shí)，假手術(shù)組和模型組給予等量

4、的羧甲基纖維素鈉。給藥8周后，采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，對(duì)各組大鼠進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶能力測試，第1-4天進(jìn)行定位航行實(shí)驗(yàn)測定逃避潛伏期時(shí)間，第5天進(jìn)行空間搜索實(shí)驗(yàn)測定穿越平臺(tái)次數(shù)。行為學(xué)測試完畢后，取材，用western blot方法和免疫組織化學(xué)染色方法測定海馬區(qū)bcl-2和bax蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、普羅布考對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)的影響
　　 1.1、逃避潛伏期結(jié)果
　　 第1-4天測

5、定的逃避潛伏期時(shí)間表示大鼠的學(xué)習(xí)能力，逃避潛伏期時(shí)間越短學(xué)習(xí)能力越強(qiáng)。三組大鼠的逃避潛伏期時(shí)間均隨訓(xùn)練天數(shù)的增加而縮短，說明訓(xùn)練可以增強(qiáng)學(xué)習(xí)能力，但是各組大鼠的學(xué)習(xí)能力卻存在差異。模型組與假手術(shù)組相比，第1-4天模型組大鼠的逃避潛伏期時(shí)間均明顯延長(P＜0.05);普羅布考組與模型組相比，第1天大鼠的逃避潛伏期時(shí)間無顯著差異(P＞0.05)，第2-4天普羅布考組大鼠的逃避潛伏期時(shí)間明顯縮短(P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，第1

6、-4天大鼠的逃避潛伏期時(shí)間均無顯著差異(P＞0.05)。
　　 1.2、穿越平臺(tái)次數(shù)結(jié)果
　　 第5天測定的穿越平臺(tái)次數(shù)表示大鼠的記憶能力，穿越平臺(tái)次數(shù)越多記憶能力越強(qiáng)。模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少(1.75±1.14VS5.58±1.83，P＜0.05);普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多（4.50±1.38VSl.75±1.14,P＜0.05）;普羅布考組與假手術(shù)組相比

7、，大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)無顯著差異(4.50±1.38VS5.58±1.83，P＞0.05)。
　　 2、普羅布考對(duì)血管性癡呆大鼠海馬區(qū)bcl-2和bax蛋白表達(dá)的影響
　　 2.1、western blot結(jié)果
　　 2.1.1、海馬區(qū)bcl-2蛋白的表達(dá)情況
　　 模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬區(qū)bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯降低（1.0783±0.1745VSl.4017±0.0880,P＜0.05）

8、;普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬區(qū)bcl-2蛋白的表達(dá)水平明顯增高(1.5117±0.1734VSl.0783±0.1745，P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬區(qū)bcl-2蛋白的表達(dá)水平無明顯差異(1.5117±0.1734VS l.4017±0.0880,P＞0.05)。
　　 2.1.2、海馬區(qū)bax蛋白的表達(dá)情況
　　 模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬區(qū)bax蛋白的表達(dá)水平明顯增高（

9、0.4467±0.1133VS0.2050±0.0748，P＜0.05）;普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬區(qū)bax蛋白的表達(dá)水平明顯降低(0.2300±0.0906VS0.4467±0.1133,P＜0.05);普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬區(qū)bax蛋白的表達(dá)水平無明顯差異(0.2300±0.0906VS0.2050±0.0748， P＞0.05)。
　　 2.2、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果
　　 2.2.1、大

10、鼠海馬CA1區(qū)bcl-2蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞情況
　　 模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬CA1區(qū)bcl-2蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少（25.00±4.29VS35.00±3.03，P＜0.05）;普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬CA1區(qū)bcl-2蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多（39.17±4.12VS25.00±4.29，P＜0.05）;普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬CA1區(qū)bcl-2蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差

11、異(39.17±4.12VS35.00±3.03,P＞0.05)。
　　 2.2.2、大鼠海馬CA1區(qū)bax蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞情況
　　 模型組與假手術(shù)組相比，模型組大鼠海馬CA1區(qū)bax蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多（49.33±2.81VS25.33±3.83，P＜0.05）;普羅布考組與模型組相比，普羅布考組大鼠海馬CA1區(qū)bax蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)明顯減少（27.00±4.65VS49.33±2.81，P＜0.05

12、）;普羅布考組與假手術(shù)組相比，大鼠海馬CA1區(qū)bax蛋白表達(dá)的陽性細(xì)胞數(shù)無明顯差異(27.00±4.65VS25.33±3.83,P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、本研究采用大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈永久性結(jié)扎的方法造成前腦慢性缺血可以很好的模擬血管性癡呆，是理想的VD動(dòng)物模型。
　　 2、VD大鼠海馬組織中存在細(xì)胞凋亡因子的表達(dá)異常，提示細(xì)胞凋亡機(jī)制參與了血管性癡呆的發(fā)病過程。
　　 3、普羅布考可以提高